全自动梯形微板法检测RhD血型影响因素探讨

Rh血型系统是最复杂的遗传多态性血型系统之一, 在临床上的重要性, 仅次于ABO血型系统而处于第2位。在输血治疗和母婴免疫引起的新生儿溶血病的临床医学中更有着重要的意义[1]。而Rh D抗原因其极高的免疫原性而最具临床价值, 产生的抗体往往可持续多年, 甚至终身[2]。随着输血技术的发展, 全自动样品处理系统在各级采供血机构得到广泛应用, 利用全自动样本处理系统对献血者进行Rh D血型进行定型, 实现了Rh D血型检测的自动化、标准化, 保证了检测结果的准确性, 降低了工作人员的劳动强度。但在实际工作中由于多种因素的影响, 全自动梯形微板法血型检测结果判读不准或与档案记录血型不符的现象偶有发生, 我们对此进行了总结分析与探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2009年5月1日至2010年4月31日无偿献血者27436人次, 每人留取试管枸橼酸钠抗凝样本5m L。

1.2 试剂

Rh D (Ig M) 血型定型试剂 (单克隆抗体) (上海血液生物医药有限责任公司) , 经中国药品生物制品检定所批检合格;氯化钠注射液500m L:4.5g (河南太龙药业股份有限公司) ;以上试剂均在有效期内使用。

1.3 主要仪器

Xantus全自动血型仪 (深圳爱康电子有限公司) ;KA-2200离心机 (日本久保田公司) ;120孔梯形微板 (日本奥林巴斯公司) 。

1.4 方法

1.4.1 梯形微板法进行Rh D定型

用全自动血型仪将试管样本浓缩红细胞10ul连同生理盐水200u L一同加到预稀释板中, 充分混合后, 每份样本吸取50u L加注到梯形微板板孔中, 再在每孔中分别加注工作浓度的Rh D (Ig M) 血型定型试剂25ul, 振荡混匀, 静置反应后, 数字血型仪分析反应图像, 根据Rh D (Ig M) 血型定型原则判定结果。

1.4.2 结果判定

判定结果时, 工作人员需目测微板上结果, 与电脑中判读的结果相对照, 即电脑结果—目测结果两对照, 均符合者按此结果发送报告, 如两者不符或与档案信息不符要用试管法对检测标本进一步做Rh D定型。如为Rh D阴性, 按《全国临床检验操作规程》进行确证[3]。

1.4.3 质量控制

每批试验均做试剂阴性、阳性对照, 定期参加卫生部临床检验中心的室间质量评价活动。

2 结果

通过对27436人次献血者样本的Rh D血型定型, 一次判读后与目测结果不符需要复核的42例。经试管复核后以试管结果为准, 检出Rh D阴性血130例, 经抗人球蛋白试验确证后Rh D阴性者129例, 弱D者1例。

3 讨论

经典的试管离心法目前仍被认为是最可信赖的Rh D定型方法, 但是它操作费时, 且易出现人为差错, 故不适合采供血系统大批量样本的检测。根据血站工作特点, 微板法适合于大批量样本的血型鉴定, 只是对不符或可疑的样本才进一步做试管法确定。但根据我们的试验结果, 梯形微板法全自动血型检测结果受多种因素的影响。造成这种现象发生的原因, 可能有: (1) 血液标本抗凝不好, 本身带有凝块, 影响加样和结果判定; (2) 献血者自身血型抗原、抗体较弱, 凝集反应不明显, 造成判断错误; (3) 工作人员粗心大意, 观察结果不细致, 未发现可疑结果或未进行试管法确定; (4) 观察结果时室内光线不好, 造成弱凝集标本被遗漏; (5) Rh D (Ig M) 血型定型试剂与生理盐水配置比例不当, 过浓或过淡均影响检测结果; (6) 梯形微板较精密, 不易用强酸或强碱浸泡, 清洗不净时板底易残留血细胞或蛋白沉渍等影响判读结果; (7) 仪器试剂槽内的试剂存放时间较长, 反复使用, 造成试剂效价降低出现漏检。为了提高Rh D定型的准确性, 针对上述原因, 我们采取以下措施: (1) 工作人员要严格执行标准操作规程, 进一步加强工作责任心, 仔细核对, 及时发现可疑结果, 重复检测, 不怕麻烦, 杜绝因疏忽大意造成的漏报和误报; (2) 从源头做起, 标本采集时要使试管和辨管内的血液与抗凝剂充分混合, 保证标本达到要求的抗凝效果; (3) 增加观察结果时的室内光源, 购买了读片灯, 将微板置于读片灯上, 保证了足够的光线, 便于目测观察结果; (4) 根据操作规程及每批试剂的效价按一定比例正确配置试剂; (5) 定期更新试剂槽内的试剂, 每次更换试剂时将残余试剂倒掉, 彻底清洗试剂槽后再倒入新鲜试剂, 保证试剂的效价; (6) 实验结束后, 将梯度微板用流水冲洗干净, 放入蒸馏水中浸泡20min, 拿出放在干燥通风避光的地方, 以确保梯度微板在使用时干燥无残留。

摘要：目的 探讨全自动梯形微板法检测RhD血型的影响因素及改进措施, 提高RhD血型检测结果的准确性。方法 每位献血者留取1份抗凝试管样本, 应用全自动血型仪梯形微板法进行RhD血型自动检测。结果可疑者使用试管法进一步鉴定;RhD阴性者应用抗人球蛋白法进行确证实验。结果 27436例样本, RhD血型1次判读后结果相符27394例, 结果不符42例, 检出RhD阴性130例。结论 全自动梯形微板法检测RhD血型技术有着不可替代的优越性, 适合血站工作特点, 但多种因素可能造成全自动血型仪错判或漏判, 工作人员要针对不同原因, 采取相应措施, 以进一步提高检测结果的准确性。

关键词：梯形微板法,全自动血型检测

参考文献

[1] 李军, 任召祺, 李俊祺, 等.输血前进行RhD检测的重要意义[J].北京医学, 2005, 27 (12) :817.

[2] 高峰.输血与输血技术[M].北京:人民卫生出版社, 2003:182.

[3] 卫生部医政司.全国临床检验操作规程[M].南京:东南大学出版社, 2006 (3) :249～251.