CIN宫颈癌高危型HPV感染与外周血染色体相关性研究

1 资料与方法

1.1 一般资料

CIN患者、宫颈浸润癌患者各20例, 年龄20~60岁, 病理检查确诊, 均未接受放疗、化疗。

对照组正常健康女性10例, 年龄25~52岁, 均无诱变剂接触史。

1.2 实验方法

1.2.1 高危型HPV-DNA检测

应用第2代的杂交捕获试验法 (Hybrid CaptureⅡ) HC-2, 它是一个放大的酶标板技术, 该技术把核酸信号扩大后利用化学发光来检测, 无需基因扩增, 可检测出13种高危型HPV (16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68) , 5种低危型HPV (6、11、42、43、45与生殖道疣有关) , 有极高敏感性。每例取宫颈外口分泌物, 进行检测。

1.2.2 细胞培养

采用低叶酸TC199培养基, 加5%小牛血清和PHA (植物凝集素, 最终浓度为0.lmg/m L) , p H值7.4~7.6。每5m L培养液接种用肝素抗凝的静脉血0.5m L, 在37℃条件下培养96h, 收获前加秋水仙素0.8mg, 常规收获细胞, 制备染色体玻片, 进行Giemsa染色[2]。

1.2.3 染色体分析

每份标本观察分析50~80个分散和形态较好的中期分列相, 在油镜下逐一对细胞染色体进行观察及结构检查, 记录染色体畸变的次数与类型, 计算染色体的畸变率 (CAR) 。对有畸变的染色体可进行显微照相, 再进行G显带分析, 染色单体裂隙、断裂, 染色体裂隙、断裂及断片等进行定位分析。按人类细胞遗传学ISCN (1995) 国际标准进行核型分析[3]。

2 结果

2.1 结果判断

染色体畸变率= (亚二倍体+超二倍体) /计数细胞×100%;染色体结构畸变标准:断裂, 裂隙, 断片, 三射体计1次畸变, 某一标本畸变率在10%以上为异常。

常见染色体结构异常指染色体模糊零乱, 浓淡, 长短不一, 个别染色体部分纵裂, 部分裂解为单体衍生染色体, 单体断裂, 双着丝粒染色体, 和无着丝点片段。

HPV感染阳性标准是1pg HPVDNA/m L (5000拷贝/m L) 。

2.2 结果

(1) CIN、宫颈浸润癌和正常对照组的染色体畸变率 (CAR) 分别为8.5%、15%和0, 三者之间有显著性差异 (P<0.01) 。

(2) CIN、宫颈浸润癌和正常对照组高危型HPV感染率分别为CINI35%, CINII80.5%, CINIII (CIS) 95.6%, 宫颈浸润癌97%, 正常对照组27.5%。

(3) 宫颈癌患者检出染色体断点包括1p22, 1q30, 1p31, 3p10,

3 p30, 1q22, 1q25, 3q22, 3 p14, 10q22, 10q24。CIN检出率染色体断

点1q23, 4p10, 正常人群对照组无着丝点片段, 未发现明显的染色体畸变。

3 讨论

癌症发生的本质是由于基因突变导致细胞无控制增殖, 研究表明染色体畸变与细胞癌变之间有着密切联系, 畸变所涉及的染色体部位与癌基因的位点或表达有关。HPV-DNA与宿主染色体整合可以导致宿主染色体的断裂或丢失, 发生染色体单体型畸变, 持续性高危型HPV感染是发生宫颈病变的必要条件, 手术干预合并高危型HPV感染的CIN患者, 其HPV清除率72% (6个月内) , 身体自然清除HPV可能原于感染病毒位于细胞核的染色体外, CINIII及宫颈浸润癌中HPV-DNA常整合于细胞DNA中, 而肿瘤常在抑制基因位点发生染色体基因缺失。尽管HVP感染在生殖器癌症的进展中起到重要作用, 但也涉及其他遗传或环境联合因素, 大量研究发现, 宫颈癌和CIN的HPV感染和病变染色体数量异常相关, 尤其是高危型HPV感染。本研究取肿瘤患者外周血淋巴细胞培养分析, 染色体数目畸变是反映染色体不稳定性的指标, 宫颈癌外周血淋巴细胞染色体畸变率高于CIN, CIN高于正常健康对照组 (P<0.01) 。CIN与对照组无显著性差异。Rao等研究证实2q33~q37缺失, 3q插入和染色体增加是侵润型宫颈的特征性改变, 总之利用目前遗传学技术证实的这些染色体的改变, 说明癌染色体不稳定性与个体遗传有关, 与个体肿瘤易感性增加有关。

摘要：大量研究提示人乳头瘤病毒感染与CIN、宫颈浸润癌密切相关。但单独HPV感染不能完全引起正常宫颈鳞状上皮组织恶化, HPV致癌必有其他因子协同作用, 染色体的不稳定性与肿瘤发生的关系已成为肿瘤学医学遗传学研究热点。研究指出宫颈浸润癌患者淋巴细胞染色体有一定程度的数目和结构异常[1], 我们对20例CIN患者, 20例宫颈癌 (I～III期) 患者采用细胞遗传学方法研究, 了解CIN, 宫颈癌患者高危HPV感染率、外周血淋巴细胞染色体畸变情况, 为深入研究宫颈癌发生机理奠定基础。

关键词：CIN,染色体

参考文献

[1] Mruty vvvs.Spontancous chromosomal aberrationsin partients with drecancerous and ancerous lesion of thd cerrix urteri[J].cancer Gent Cytogenet, 1985, 17:247.

[2] 刘权章.人类染色体方法学[M].北京:人民卫生出版社, 1992:272.

[3] Mitel man F.An International System for Human Cytogenetic Nomeenclature[M].Basel:S.Karger, 1995:12.