表达对公司感恩的演讲稿

表达对公司感恩的演讲稿（共8篇）

篇1：表达对公司感恩的演讲稿

感恩公司给予的恩惠，我们会更加忠诚敬业，尽心尽力，勤奋的工作，提高工作效率，工作质量，与公司发展风雨同舟，荣辱与共，兴衰同在，为公司发展壮大努力工作。以下是小编给大家带来的几篇优秀员工代表对公司感恩演讲稿范文，供大家参考借鉴。

优秀员工代表对公司感恩演讲稿范文1

尊敬各位领导、评委同事：

大家好!首先我要感谢公司给我们这样一个展示自己的舞台。

我属于蒙牛公司这个大家庭中的一员，幸福就来自于我的身边，我身边蒙牛公司的人，来自于对工作的热爱，对岗位的热爱，对蒙牛公司事业的热爱。因为热爱所以勇于进取、因为热爱所以乐于奉献。今天我能够站在这里，没有什么豪言壮语，也没有什么长篇大论，只是和大家一起感受对公司的那份热爱。

光阴荏苒，岁月从指间悄然流逝，我还记得第一次踏进蒙牛公司的大门，是陌生，是茫然。但当听到师傅们说他们已经在自己的岗位上工作了几年的时候，青春年少的心依然充满了不解和疑惑。一个人怎么可以面对同一份工作几年，不枯燥不厌倦?当时的我对于在蒙牛公司的未来没有过多的希望，因为我更期望自己有一个多姿多彩充满挑战的未来。

如今在蒙牛公司这个企业里我已经走过了几年，有了在不同岗位工作的经历。我深深的理解了师傅们可以几年如一日热爱这个企业的原因，也为自己能够成为其中的一员而感到自豪。奋发向上的员工队伍，我坚信一代代蒙牛公司人可以开创一个充满希望的明天，这个企业里会有一个辉煌的未来。

回首参加工作以来走过的每一步，我发现自己是如此的幸运。入社之初，钱不会数，算盘不会打，师傅们一遍又一遍手把手的交会我。这个集体、朝夕相处的同事让我收获了很多，在我的心中集体的和谐环境、人文管理、企业文化让我有了归属感和认同感。几年来我亲眼目睹我们的员工队伍不断扩大，人员素质逐年提高，业务种类不断增加，制度更加完善，管理日趋细化……亲身体会到蒙牛公司事业蒸蒸日上，我骄傲我是蒙牛公司的一员。

我们需要的是团结、是沟通、是坦诚、是信任、是感恩。在场的每一位同事，我相信你们的内心也和我一样怀着一份感恩的心来面对我们的企业，面对我们的工作，我始终坚信，蒙牛的明天会更加精彩，更加辉煌!

优秀员工代表对公司感恩演讲稿范文2

各位领导、各位同事：

大家好!

太阳高升，人心沸腾，有幸登上这个舞台，是我的荣幸，我愿跟着领导们、同事们一道，把这个舞台建设得更大、更好、更强，尽管我只是一名普通的公司职员。就像五年多来一样，跟同事们一起努力、进步。

经过同事们艰苦的努力，使公司从成立之初的一穷二白走到今天拥有1000多人的企业，规模不断扩大。

现在的辉煌饱含着我们所有同事的智慧与汗水，也记录着我们所有人自豪的成长历程。

心有多宽广，舞台就有多大，企业就是我们的舞台，领导是指挥，我们是合唱团中的一员。

人，需要展示他固有的才华，只有当他的才华展示出来并为企业所用，他才能叫做可用之才。

不管一个人的能力有多强，一但失去了表演的空间和人生的舞台，那他也就失去了成功的机会。

个人的发展得依托于企业的造就、领导的栽培，当我们学会经营自己，把自己的职业规划同企业的长远战略有机地结合起来，那我们就一定能取得成功并顺利实现个人理想，不管你是企业高管，还是一名普通的职员，只要有梦，只要愿与公司战略同步，就一定能得到持续地成长，在为企业创造价值的同时成就个人。

公司经营目标不断提高，企业不断壮大，我们也需要同步学习并力求适应企业新的发展需要，只有这样，只有与公司一起成长，我们个人的发展才能同企业的发展协调并互相促进。

如果企业发展壮大了，我们自己的能力却没能及时提升到相应的高度，那我们就无法适应企业发展新的需要，并会拖累企业长远战略的步伐。于已于企业来说均不利，只有大家好，才是真的好!

作为一名普通员工，我们在做好本职工作的同时不断地抽业余时间去充电，不继地寻找能帮助企业提高经营水平的新方法，哪怕一年中只找到了一条于公司有利的建议，我想只要我们尽力了，并努力与企业同步成长了，也就无怨无悔。

人，活着，总是需要进步的。因为不仅企业在进步，整个社会都在进步。

作为国家，落后就会挨打;作为个人，落后就意味着生活的窘迫。

工作天天有，好企业不长招，这是个事儿人人都知道。

找的工作好，不如企业发展得好，为何?机遇是人创造的，只有懂得珍惜现在，才有机会赢得未来。

调整好自己的职业规划，保持与企业长远战略的同步，与公司一起成长，成就企业的同时也就造就了我们个人。

谢谢，谢谢大家!不求我的演讲最好，但求一个比一个做的比说的更好，大家好才是真的好!

优秀员工代表对公司感恩演讲稿范文3

尊敬各位领导、评委同事：

大家好!

首先我要感谢公司给我们这样一个展示自己的舞台。我属于蒙牛公司这个大家庭中的一员，幸福就来自于我的身边，我身边蒙牛公司的人，来自于对工作的热爱，对岗位的热爱，对蒙牛公司事业的热爱。因为热爱所以勇于进取、因为热爱所以乐于奉献。今天我能够站在这里，没有什么豪言壮语，也没有什么长篇大论，只是和大家一起感受对公司的那份热爱。

光阴荏苒，岁月从指间悄然流逝，我还记得第一次踏进蒙牛公司的大门，是陌生，是茫然。但当听到师傅们说他们已经在自己的岗位上工作了几年的时候，青春年少的心依然充满了不解和疑惑。一个人怎么可以面对同一份工作几年，不枯燥不厌倦?当时的我对于在蒙牛公司的未来没有过多的希望，因为我更期望自己有一个多姿多彩充满挑战的未来。

如今在蒙牛公司这个企业里我已经走过了几年，有了在不同岗位工作的经历。我深深的理解了师傅们可以几年如一日热爱这个企业的原因，也为自己能够成为其中的一员而感到自豪。奋发向上的员工队伍，我坚信一代代蒙牛公司人可以开创一个充满希望的明天，这个企业里会有一个辉煌的未来。

回首参加工作以来走过的每一步，我发现自己是如此的幸运。入社之初，钱不会数，算盘不会打，师傅们一遍又一遍手把手的交会我。这个集体、朝夕相处的同事让我收获了很多，在我的心中集体的和谐环境、人文管理、企业文化让我有了归属感和认同感。几年来我亲眼目睹我们的员工队伍不断扩大，人员素质逐年提高，业务种类不断增加，制度更加完善，管理日趋细化……亲身体会到蒙牛公司事业蒸蒸日上，我骄傲我是蒙牛公司的一员。我们需要的是团结、是沟通、是坦诚、是信任、是感恩。在场的每一位同事，我相信你们的内心也和我一样怀着一份感恩的心来面对我们的企业，面对我们的工作，我始终坚信，蒙牛的明天会更加精彩，更加辉煌!

优秀员工代表对公司感恩演讲稿范文4

多念鱼水情，常怀感恩心，在这个世界上有许多地方需要我们感恩。首先我们感恩父母，是父母给予了我们生命，不辞辛苦，哺育成长;感恩师长，给予我们知识;感恩朋友，送来真诚的友谊。感恩XX清洁能源，给了一个很大的发展机会。只有心怀感恩，才能滋润生命的人生真谛。

用感恩的心做人，用忠诚的心干事，敬业爱岗是员工忠诚职业的重要体现。“滴水之恩，当涌泉相报”的古训、“吃水不忘挖井人”的格言和“羊羔跪乳、乌鸦反哺”故事的启发，我们要懂得感恩。作为一个进入XX企业时间长的员工，不要将拥有的一切都视之为理所当然，对我们的公司要有一颗感恩的心。感恩企业给我们一个良好的工作、生活、学习的环境，给我们提供了优厚的待遇和物质生活的保障，更为我们构建了一个展现自我价值的平台，让我们可以全身心地投入到自己的工作当中，感受到了工作的充实，生活的快乐。

感恩领导，感谢领导的严格要求和言传身教，使我们不断成长和进步，是我们的人生更加充满朝气和魄力，()领导的关心，使我们更加感受到企业的温暖，更加珍惜和感激，如果没有领导的信任、支持，我们的努力最终都不可能实现，领导为我们提供了就业机会和成长空间，使我们得以施展自己的能力和才华。

心存感恩，生活会更和谐;心存感恩，工作会更快乐，让我们心怀感恩去回报企业，祝福我们的XX企业明天会更好!

优秀员工代表对公司感恩演讲稿范文5

尊敬的各位领导，青年朋友们：大家好!

今天我演讲的题目是：怀感恩心，做感恩事。

落叶在空中飞舞，谱写着一曲感恩的乐章，那是大树对滋养它的大地的感恩;白云在蔚蓝的天空中飘荡，描绘着一幅幅感人的画面，那是白云对哺育它的蓝天的感恩。因为感恩才会有这个多彩的世界，因为感恩才会有努力工作的热情，因为感恩才让我们懂得了生命的真谛。

记得一位名人曾经说过：“生活就是一面镜子，你笑他也笑，你哭他也哭。”你感恩生活，生活将给予你灿烂的阳光;你不感恩，只知一味地怨天尤人，最终可能一无所有!

多一份理解，多一份信任，多一份关怀。生活告诉我们要时时怀有一颗感恩的心。怀着一颗感恩的心才更懂得尊重，尊重生命、尊重劳动、尊重创造。怀着感恩的心，一代伟人邓小平在古稀之年说：“我是中国人民的儿子，我深深的爱着我的祖国和人民!”怀着感恩的心，诗人艾青在他的诗中写到：“为什么我的眼中饱含泪水，因为我对这片土地爱的深沉。”作为百大员工，我们更应懂得感恩企业，感恩顾客，感恩社会。我们不能忘记，没有企业的发展，哪有小家。

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篇2：表达对公司感恩的演讲稿

1、感恩由心而生，用心而做。有一颗感恩的心，多一份温暖的情。

2、人，要拥有一颗感恩的心，学会接纳别人，也要学会认识自己。

3、向所有帮忙过我的朋友和我所爱的朋友说声感激，感激你走进我的生命，让我的生命丰富、美丽，我愿我有生韶光，带你无穷欢愉!

4、蜜蜂从花丛中采完蜜，还知道嗡嗡地唱着道谢;树叶被清风吹得凉爽，还知道飒飒地响着道谢。但是，我们还不如蜜蜂和树叶，有时候，我们往往容易忘记了需要感恩。

5、不要总是数着自己付出了多少，要记住从别人那得到了多少。

6、感恩祖国，没有祖国的繁荣昌盛，哪有今天的幸福生活，她给了我们健康成长的摇篮，给了我们发挥自如的空间。

7、有时候，没有下一次，没有机会重来，没有暂停继续。有时候，错过了现在，就永远永远的没有机会了。

8、不要奢望朋友给你经济上得任何帮助，钱对任何人都是不够用的，有一万元的人想干两万元的事，有10万元的人想干20万元的事。

9、老师您就像蜡烛点燃自己，照亮别人：像吐尽青丝的春蚕，为了让年轻一代得到攀登科学顶峰的金钥匙，您费尽了心血。在教师节之际，祝您身体健康!

10、春蚕到死丝方尽，蜡炬成灰泪始干。老师，你辛苦了!

11、用真诚浇灌友谊;用感激浇灌亲情。

12、人总是容易在纷烦又平淡的生活中变得麻木，谢谢你的感恩节短信，让我知道在不远处还有人默默的关心着，也教会我以感恩的心对待生活!

13、无论将来如何，我都要感谢你，感谢你来到我的生命中，带来了美丽、快乐，感谢你给了我永远珍视的记忆。感恩节快乐。

14、直到有一天，当我发现我们都已经渐渐地老去的时候，我才感悟到人世间最珍贵的东西莫过于朋友之间的友谊!朋友，谢谢人生路上曾有你，祝感恩节快乐!

15、如果一个人身受大恩而后来又和恩人反目的话，他要顾全自己的体面，一定比不相干的陌路人更加恶毒，他要证实对方罪过才能解释自己的无情无义。

16、感恩老师，是他们给了我们知识和看世界的眼睛，教会了我们许多东西，我们的成功就是他们最大的骄傲。

17、幸福，是有一颗感恩的心，一个健康的身体，一份称心的工作，一位深爱你的家人，一帮可以信赖的朋友。感恩为幸福之首，是因为不知道感恩的人，永远就不会幸福。

18、风筝是幸福的，因为它对线心存感恩;绿叶是幸福的，因为它对根心存感恩;鱼儿是幸福的，因为它对海心存感恩;而我是幸福的，因为我对一切心存感恩。

19、短信贺岁：岁岁平安，安居乐业。业和邦兴，兴旺发达。大吉大利，力争上游。游刃有余，青春永驻，祝你快乐!

20、老师是我们成长的领路人，是我们的朋友，老师尊重、理解和爱护我们，言传身教，让我们受益终身，老师为我们付出心血和汗水，我们应该感恩老师。

21、拨动真诚的心弦，铭记成长的辛酸，成功的道路上永远离不开您，亲爱的老师，祝您永远幸福!

22、老师您好!九月开学了，也应来了教师节!老师您辛苦了!老师你是我一生最难忘的人，因为有了你，让我的生活出现了乐趣，有了你我的人生出现转折，谢谢你!

23、那么，让我们合上双手，闭上双眼，向上天诚心的祷告，愿天下人都学会感恩“感恩”!

24、不管一个人取得多么值得骄傲的成绩，都应该饮水思源，应该记住是自己的老师为他们的成长播下了最初的种子。

25、手中的粉笔慢慢化为漫天爱的灰屑，这爱染白了您原本乌黑的头发。在这特别的日子，献上一句：老师您辛苦了!

26、感恩自然，我们在它的羽翼下生活和工作，欢笑着成长，它是美丽的，它是无私的，它给予我们一切。

27、你是我见过最美丽的树叶，让我的森林为你凋谢;你像一首旋律让我的生命多和谐，我只能用小小声音说感谢，小到只有你能了解!感恩节快乐!

28、花儿感恩于大地的滋养，才有了艳丽多姿芳香扑鼻;雄鹰感恩于蓝天的广博，才有了展翅翱翔凌击长空;游鱼感恩于大海的包容，才有了腾波戏浪游姿优美。

29、如果我是小草，我会感恩大地的滋润与培养;如果我是红花，我会感恩绿叶无私的奉献精神;如果我是大海，我会感恩海鸥为我添加风彩。

30、感恩生活，让我们在漫长岁月的季节里拈起生命的美丽，不断诠释着新的含义。

31、那么，让我们合上双手，闭上双眼，向上天诚心地祷告，愿天下人，铭记感恩，铭记恩情!

32、最终长成参天大树。我感谢您，是用千言万语表达不出来的。

33、生活在感恩之中，才是真正的幸福、美满。

34、为他人弯腰，拾起善意的心情;为他人着想，换来真切的感激。

35、我愿是候鸟，在迁徙的路上伴你飞翔;我愿是雄鹰，在攀登的途中给你勉励;我愿是火鸡，在感恩节被你品尝!呵呵，这样的朋友够仗义吧!感恩节快乐喔!

36、您给了我们一杆生活的尺，让我们自己天天去丈量;您给了我们一面模范行为的镜子，让我们处处有学习的榜样。

37、感恩之心，人皆有之;感恩之人，世皆敬之。

38、人世间最美丽的情景是出现在，当我们怀念到母亲的时候。

39、感恩的心是由无数次伸手感化而成，伸出你的手，感化别人的心。

40、让我们怀着感恩的心情面对生活，为所有关心我们的人，展开我们的笑容!

41、你是平凡的，你是特别的，只愿平凡与特别伴随于你!平凡+特别=幸福，快乐!

42、老师，大家都说您培养着祖国的栋梁;我却要说，您就是祖国的栋梁。正是您，支撑起我们一代人的脊梁!

43、向帮助过我的朋友和我所珍爱的朋友说声感谢，感谢你走进我的生命，让我的生命丰富而又美丽，我愿用我有生的时光带给你无限的快乐。祝感恩节快乐!

44、感恩是每个人应有的基本道德准则，是做人的起码修养。很多人很多事，其咎盖源于不会不愿感恩，鸦有反哺之义，羊有跪乳之恩，不懂感恩，就失去了爱的感情基础。

45、夜很深，想念的心在空中游荡，无论我们距离有多远，至少可以享受同一片的星光!感谢你在我生命中出现的每一刻!

46、茫茫人海中，最是你那回眸一笑的瞬间温柔，有如江边杨柳垂下的娇羞，让我尘封已久的心灵绽开!感谢上帝让我遇上你。

47、心灵的花朵需要永爱来浇灌，感激的世界需要用真情来装点。

48、回报所有的施予，包括痛苦;感激全部的幸福。

49、一个个日子升起又降落，一届届学生走来又走过，不变的是您深沉的爱和灿烂的笑容。祝福您亲爱的老师!

50、会感恩的人，才懂得珍惜;会珍惜的人，才能够快乐。

51、让感激的射线延伸到浩瀚的苍穹，在人们的心中留下一道永恒的记忆。

52、拥有感恩的心，你会感激地球，是它给了我们安身立命之所，我们在宇宙中有一个生存的环境，富饶土地上的各种物产，给我们的生存提供了充足的物质保障。

53、在家庭中，孩子最微小的欢笑，就是使父母认识统一能得到巩固的伟大精神动力。

54、怀有一颗感恩的心，不是简单的忍耐与承受，而是以一种宽宏的心态积极勇敢地面对人生。

55、雁过无痕，叶落无声，美丽是些具体而实在的东西，无处不在的守侯着你。感激这个世界的魅力，感激你的存在，感激我们的相识!

56、春蚕到死丝方尽，蜡炬成灰泪始干。

57、老师，您是美的耕耘者，美的播种者。是您用美的阳光普照，用美的雨露滋润，我们的心田才绿草如茵，繁花似锦!

58、曾经的陌生不代表永恒，不经意间，某种感觉延续你我的友情，寂寞旅途中，能收到你殷切的关怀和诚心的祝福，我欣喜：红尘中有你同行!

59、心中常存感激，心路才能越走越宽。

60、太阳底下最光辉的职业，人类灵魂的工程师。

61、老师。请相信我们。我们不会让您们失望的!

62、老师，感谢您用自己的生命之光，照亮了我人生的旅途。

63、老师。感谢您们。请接受您们的学生的祝福吧!

64、朋友帮助是善事，是道义;朋友不帮助是道理，也无可厚非，不该心怀怨恨。

65、感恩是一种最大的美德，时时处处怀着感恩的心，你会发现自己你能享受生活，你能随时随地的获得快乐。

66、我崇拜伟人、名人，可是我更急切地把我的敬意和赞美献给一位普通的人――我的老师您。

67、有一道彩虹，不出现在雨后，也不出现在天空，它常出现在我心中，鞭策着我堂堂正正地做人――给时刻关怀着我的导师!

68、传播知识，就是播种希望，播种幸福。老师，您就是这希望与幸福的播种人!

69、见利忘义，不知道恩德，这就是造作罪业。

70、收拾起心情，继续走吧，错过花，你将收获雨，错过这一个，你才会遇到下一个。

71、老师在我心里，您一直照顾我们，一直关心我们。您这么辛苦，我们能做些什么呢?我知道只有一直好好学习，才能给您最好的回报!

72、感恩之人亮若璀璨星光，仇怨之人，暗若惨淡愁云。

73、当我回眸看到您充满期望的眼神，我哭了。我知道我最大的成就，就是您最大的满足，我不会放弃的。

74、道出于平和安静，德出于谦和大度，慈出于博爱真诚，善出于感恩包容，福出于满足快乐，喜出于健康成就，友出于平时一点一滴的关爱。

75、精彩完美的人生，是怀着感激的人生。

76、要善待爱情，因为它不会一辈子跟着你!

77、向帮助过我的朋友和我所爱的朋友说声感谢，感谢你走进我的生命，让我的生命丰富而又美丽，我愿以我有生的时光，带给你无限的快乐，祝感恩节快乐!

78、忘记别人对不起你的，记住你对不起别人的。

79、康乃馨的芬芳为母亲温馨的绽放，花的美丽如母亲般慈祥的笑脸，淡淡的清香让人陶醉心房，携带一束鲜花来到您的身旁，花儿浓缩了我对您的祝福，绿叶饱含着对根的情义。

80、每天攒下一点快乐，你就是世界上最幸福的人。

81、感恩，生命如此不平凡，生命长河中确有宝石在熠熠生辉，感恩，生命如此丰富与多彩，万物生灵赐予的永不泯灭的生活热情。

82、您推崇真诚和廉洁，以此视作为人处世的准则。您是我们莘莘学子心目中的楷模。

83、生活需要一颗感恩的心来创造，一颗感恩的心需要生活来滋养。常怀感恩心，一生无憾事。翻开日历，一页页崭新的生活会因为我们的感恩而变得更加的璀璨。

84、我感恩对我不满的人，是他们的不满，我才认识到自己的不足，从而朝着正确的方向前进。

85、是他给了你恩惠，是他给了你现在，去感恩他吧!

86、幸福的生活中少不了你的陪伴，高兴的快乐都是关于你的出现。感谢有你，生活不在孤单;感谢有你，距离不在遥远;感谢有你!

87、生活总是这样，只要你仔细聆听，总会发现一丝爱的声音。

88、心怀感恩让人少丝怨恨，心怀感恩让生活多些灿烂，心怀感恩让人生更添魅力。

89、不要真的以为得不到的才是最好的，还不如好好珍惜现在拥有的。

篇3：表达对公司感恩的演讲稿

食线虫真菌是植物寄生性线虫潜在的生物防治因子之一,对该类真菌侵染线虫的机制进行研究是构建高效生物防治菌和提高生防效率的基础。Dactylellina cionopaga(=Monacrosporium cionopaga,Dactylella cionopaga,Golovinia cionopaga)是一种产生黏性分枝的捕食线虫真菌。该菌对根结线虫Meloidogyne javanica具有很好的防治效果[1],也能够防治胞囊线虫Heterodera schachtii[2]。由于生长较快,与其他食线虫真菌相比更容易被开发成制剂[3]。目前关于产生黏性分枝的食线虫真菌的侵染机制研究鲜有报道。基因外源表达是鉴定基因功能的重要方法之一。D.cionopaga丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ经荧光定量PCR证明在该菌侵染线虫过程中表达量更高。本文通过对融合表达载体pGT21M进行改造,构建了含有组氨酸标签的黑曲霉表达载体,外源表达了D.cionopaga丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株和质粒

Dactylellina cionopaga AS 3.6776(SQ27-3)分离自云南三七根部土壤,为中国科学院微生物研究所真菌地衣系统学重点实验室保存。黑曲霉(Aspergillus niger)201和黑曲霉表达载体pGT21M由中国科学院微生物研究所真菌地衣系统学重点实验室唐国敏老师惠赠。

1.1.2 试剂

酶液:5~8mg/ml Lysing enzyme(Sigma公司),1mg/ml cellulase R-10(日本Yakult公司),0.8mol/L MgSO4缓冲液配制。Tris-HCl缓冲液:50mmol/L,pH 7.5。限制性内切酶和T4 DNA连接酶购自宝生物工程(大连)有限公司。化学试剂为分析纯,购自上海生物工程技术服务有限公司。硝酸纤维素滤膜和超滤管购自Millipore公司。His·Bind Column购自Novagen公司。改良的BCA蛋白检测试剂盒购自上海生物工程技术服务有限公司。

1.1.3 仪器

凝胶电泳系统(BIO-RAD,美国);紫外凝胶成像系统(BIO-RAD,美国);离心机(Sigma,德国);微量移液器(Gilson,美国);梯度PCR仪(Biometra,德国)。

1.1.4 培养基

选择培养基:含有200μg/ml潮霉素的查氏培养基。

发酵培养基:6%可溶性淀粉,2%酵母提取物,0.5% KH2PO4,0.5%玉米粉。

1.2 方法

D.cionopaga丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ通过信号肽捕获技术克隆后测序(GenBank accession No.JF699729)[4]。组氨酸标签以质粒pPICZαA为模板进行扩增,使用His-L(5′-tgtgggcccaacgatgagatttccttc-3′)和His-R(5′-cgagggccctcaatgatgatgatgatg-3′)为引物。将扩增产物连接至质粒pGT21M的ApaⅠ位点。应用NotⅠ酶切连接产物,通过连接酶使纯化的酶切产物的大片段发生自连,获得多克隆位点3′末端具有组氨酸标签的质粒pGT21M-HIS。以Pn-L(5′-cgaatcgatggcagaggaaggcgaaaagct-3′)和Pn-R(5′-ggaatcgatagtggagcaagtcctgaggga-3′)为引物,扩增丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ无信号肽编码序列的DNA片段,用ClaⅠ酶切后与同样酶切并去磷酸化的载体pGT21M-HIS连接,转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,构建丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ黑曲霉表达载体pGT21M-HIS-PrI。以Checkinsert(5’-tgcggccacatctgccattg-3’)为测序引物对该表达载体进行测序鉴定。

黑曲霉的原生质体制备基本参照K.Wernars等人的方法[5]。黑曲霉原生质体的转化使用PEG-CaCl2介导的共转化方法。将转化子在选择培养基上分离纯化。采用CTAB法提取黑曲霉转化子基因组DNA,以Pn-L、Trp-R2(5’-ggccggatccaagaaggattacctctaa-3’)为引物,通过PCR反应鉴定整合了目的基因的转化子。D.cionopaga丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ在黑曲霉细胞中的转录用RT-PCR进行检测,以进行了DNA消化的总RNA为模板,引物为Pn-L和Pn-R。

将鉴定的转化子与原宿主菌同样活化后接种于发酵培养基中,通过SDS-PAGE和蛋白平板活性检测筛选转化子。初筛样品1次重复,于发酵4d、6d后取发酵上清进行检测。复筛样品3次重复,分别于培养3d、4d、5d、6d、7d和8d后取发酵液进行SDS-PAGE和蛋白平板活性检测。

蛋白酶酶活平板测定方法如下:配制0.1mol/L柠檬酸-磷酸钠缓冲液(pH 7.0)。将100ml缓冲液分为两份,在其中50ml缓冲液中加入1g琼脂糖煮沸,放至55℃水浴保温。同时,将另外50ml缓冲液加热至55℃,然后将0.5g酪蛋白(casein)缓慢溶于其中。将两份溶液混合后倒培养皿。测定酶活时,在casein平板上用打孔器(Ф=4 mm)打小孔,加入30~50μl酶液,30℃恒温静置,观察有无透明圈形成。当制备pH 5.0蛋白平板时,用2%脱脂奶粉代替酪蛋白。

大量发酵黑曲霉转化子,进行重组蛋白的分离纯化。过滤发酵液除去菌丝体,依次用饱和度为25%和80%的硫酸铵溶液分级沉淀上清中的蛋白质,10 000g离心。将沉淀重悬于Tris-HCl缓冲液中,然后对50mmol/L Tris-HCl缓冲液进行透析除盐,使用BaCl2检测透析效果。应用0.4μm硝酸纤维素滤膜过滤透析液,获得丝氨酸蛋白酶粗酶液。重组蛋白通过亲和层析进行纯化。粗酶液的上样与洗脱遵循His·Bind Column说明书进行。每500μl洗脱液收集一管,用超滤管脱盐并浓缩样品。对纯化的酶液进行SDS-PAGE和蛋白平板活性分析。

2 结果与分析

黑曲霉能够分泌大量内源蛋白。为了方便目的蛋白外源表达后的分离纯化,在黑曲霉表达载体pGT21M的多克隆位点下游插入了组氨酸标签。经测序鉴定证明构建了具有HindⅢ、BstBⅠ、ClaⅠ、HpaⅠ、NotⅠ、XbaⅠ克隆位点的载体pGT21M-HIS。将丝氨酸蛋白酶PrDⅠ前肽编码序列插入pGT21M-HIS的ClaⅠ位点,酶切和测序结果均显示构建了该基因的融合表达载体pGT21M-HIS-PrI,载体图谱如图1所示。

通过原生质体共转化,将pGT21M-HIS-PrI导入部分内源蛋白酶基因敲除的黑曲霉菌株201,获得共转化子164个。随机选取潮霉素抗性菌落,用PCR方法鉴定了含有目的基因的转化子39个(图2A)。收集发酵2d的黑曲霉菌丝体,提取总RNA,进行RT-PCR检测,鉴定目的基因是否转录的结果表明,转化子Pn7b、Pn11、Pn140转录了目的基因(图2B)。培养经过PCR鉴定的转化子,转化子初筛的SDS-PAGE分析结果表明,与对照相比转化子发酵液泳道具有微弱的蛋白差异条带。蛋白平板活性检测结果显示,在pH 5.0蛋白平板上转化子发酵液具有蛋白水解活性。复筛结果证明了,发酵4d的转化子目的蛋白表达量较高。另外,用液氮研磨破胞,应用SDS-PAGE及pH 5.0和pH 7.0蛋白平板检测转化子胞内蛋白酶的表达量及其活性。结果表明,在SDS-PAGE凝胶上不能确定有目的条带出现,转化子和对照之间无明显的蛋白表达和蛋白酶活性差异。

A.PCR.1:A.niger 201;2~6:推测的转化子;B.RT-PCR.1:A.niger 201;2~6:推测的转化子。 A.PCR.1:A.niger 201;2-6:Putative transformants;B.RT-PCR.1:A.niger 201;2-6:Putative transformants.

进行转化子的大量发酵,采用硫酸铵沉淀、亲和层析和超滤纯化浓缩发酵上清200倍,应用SDS-PAGE和蛋白平板检测纯化产物。结果表明,纯化产物在SDS-PAGE凝胶分子量约为45kDa处具有目的条带(图3),获得的酶液在pH 5.0蛋白平板上30℃条件下温育过夜,显示出了蛋白水解活性(图4),而在pH 7.0蛋白平板上无水解圈出现。改良的BCA蛋白浓度检测结果表明,纯化后酶液的蛋白浓度为30μg/ml。

3 讨论

丝氨酸蛋白酶是食线虫真菌重要的侵染相关蛋白之一。目前已经从食线虫真菌中至少分离纯化了16种丝氨酸蛋白酶。酶学、免疫学和基因表达研究证明,它们分别在捕食真菌(Arthrobotrys oligospora PΠ和Aoz1、D.cionopaga Dcp等)、内寄生真菌(Hirsutella rhossiliensis Hasp和Hnsp、Verticillium suchlasporium P32和V.chlamydosporium VCP1)和卵寄生真菌(Lecanicillium psalliotae Ver112、Paecilomyces lilacinus pSP-3和PIP、Clonostachys rosea Lmz1和PrC)对植物寄生性线虫的侵染过程中发挥作用[4,6,7]。利用丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶抑制剂处理A.oligospora明显影响了该菌对线虫的侵染[8]。在A.oligospora中表达多拷贝丝氨酸蛋白酶PⅡ基因,可以增加侵染结构的数量,提高该菌对线虫的致病力[9]。V.suchlasporium丝氨酸蛋白酶P32在侵染过程中定位于被侵染线虫的卵上[10]。电子显微镜观察结果显示,分离纯化的H.rhossiliensis丝氨酸蛋白酶能够改变线虫体表形态[7]。对食线虫真菌的丝氨酸蛋白酶及其基因进行结构和功能分析是构建生物防治因子工程菌株的重要理论基础。D.cionopaga丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ具有信号肽,编码胞外蛋白,在该菌侵染线虫过程中高表达,推测的氨基酸序列与其他食线虫真菌蛋白酶高度同源,与从D.cionopaga中纯化的丝氨酸蛋白酶Dcp的N-端序列不同[4]。该基因及其编码的丝氨酸蛋白酶的结构和功能有待于研究。

由于在食线虫真菌中往往存在多种丝氨酸蛋白酶同功酶,从细胞发酵液中纯化蛋白然后进行结构和功能分析受到了蛋白量和特异酶鉴定可重复性的限制。进行基因外源表达是解决该问题的途径之一。目前建立的基因外源表达系统包括昆虫杆状病毒表达系统、大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统、极端嗜盐古菌表达系统、酵母表达系统、丝状真菌表达系统、哺乳动物细胞表达系统和植物表达系统。在各种外源表达系统中,大肠杆菌表达系统和酵母表达系统常被用于丝状真菌基因的外源表达。大肠杆菌表达系统具有表达量高的特点,但是表达的外源蛋白往往以包涵体的形式存在,而且不能够对表达的蛋白进行翻译后修饰。应用酵母表达系统可以进行外源基因的胞外和胞内表达,该表达系统也能够对表达的蛋白进行糖基化修饰。Clonostachys rosea丝氨酸蛋白酶Lmz1[11]和H.rhossiliensis丝氨酸蛋白酶Hasp在毕赤酵母(Pichia pastoris)中均已获得了外源表达,并且重组蛋白表现出了蛋白水解活性[7]。然而,我们对D.cionopaga蛋白酶基因PrDⅠ进行毕赤酵母外源表达时,SDS-PAGE检测结果显示,该基因不能在以BMMY为诱导培养基培养的毕赤酵母GS115中获得胞外表达。黑曲霉遗传背景清晰,具有较强的分泌胞外蛋白的能力,能够分泌大量淀粉酶,长期用于食品和药物的工业化生产,被认定为安全的生产菌株[12,13,14]。黑曲霉表达系统是主要的丝状真菌表达系统之一,黑曲霉表达系统的建立为丝状真菌基因外源表达获得成功提供了更大的可能。报道的外源基因表达量能够达到微克级到克级[15,16,17,18]。然而,目前可用的黑曲霉表达系统还很有限[19,20,21]。就我们检索的文献,至今还没有应用含有组氨酸标签的分泌表达载体在黑曲霉中进行成功外源表达的研究报道。在本研究中,使用由pGT21M改造的载体,将D.cionopaga可能与侵染机制相关的丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ转入糖化酶高产菌株黑曲霉201中进行了外源表达。

D.cionopaga丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ序列分析表明,该基因推测的前肽理论分子量为39.84kDa,成熟肽理论分子量为28.90kDa。然而,D.cionopaga丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ在黑曲霉201中外源表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析证明分子量约为45kDa,说明目的重组蛋白在表达后进行了翻译后修饰。该现象与丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ序列的翻译后修饰位点分析结果和A.oligospora PΠ黑曲霉表达结果的报道相一致[4,22]。A.oligospora天然PΠ蛋白的分子量为40kDa,而在黑曲霉AB1.13pclA和AB1.18中外源表达的重组蛋白的分子量为48kDa[22]。重组表达的PΠ在抑制剂类型、底物谱和最适pH反应上与天然蛋白无明显差异。D.cionopaga天然的PrDⅠ的动力学特性还有待于研究,以与重组蛋白的性质相比较。在本研究中,黑曲霉表达的外源蛋白在酸性条件下具有活性,与大多数碱性蛋白酶的主要活性范围不同,该反应特征可能也与蛋白质经翻译后修饰的结果有关。

M.Ward等报道使用黑曲霉糖化酶N-末端编码序列进行外源基因的融合表达可以增加目的蛋白的表达量[23]。本研究应用的载体的母质粒黑曲霉表达载体pGT21M在多克隆位点上游具有黑曲霉糖化酶基因启动子和N-端编码序列,在下游具有色氨酸终止子,能够引导外源基因进行胞外融合表达。刘丽等用pGT21M母质粒pGT10大量表达了细菌血红蛋白[24]。张金祥等应用融合表达载体pGT21M和非融合载体pGT进行基因外源表达的结果显示,以pGT21M构建的转化子表达外源蛋白的量较低,但是比活力较高[25]。本研究使用改造的pGT21M进行了丝氨酸蛋白酶基因的融合表达,与木聚糖酶B相比,外源基因表达量较低[15]。以非融合载体pGT构建D.cionopaga丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ表达载体将可能能够提高该基因在黑曲霉中的外源表达量。

作为蛋白分泌表达的重要宿主,黑曲霉中与错误折叠蛋白分泌压力相关的基因转录与翻译反应已被分析[26]。N.S.Dunn-Coleman等报道,应用筛选模型对含有目的基因表达载体的黑曲霉突变子进行筛选,可能能够获得外源蛋白分泌量达到克级的转化子[27]。然而,本文筛选的转化子胞内蛋白检测结果初步显示了,对获得的转化子进行突变难以进一步增加外源蛋白的分泌表达量。本研究使用的黑曲霉菌株为胞外蛋白酶部分敲除菌,进一步构建蛋白酶缺陷宿主或根据蛋白分泌压力相关基因优化宿主将可能改善黑曲霉表达体系的外源表达量[28]。

G.M.Eibes等证明,通过优化发酵条件能够提高A.nidulans转化子的外源表达量[29]。虽然该策略在过氧化物酶的黑曲霉表达中没有发挥作用,但是在其他基因的黑曲霉表达中,改变发酵条件可能将提高特异外源蛋白的表达量。D.cionopaga PrDⅠ黑曲霉转化子的发酵条件有待于进一步优化。

4 结论

本研究构建了含有组氨酸标签的黑曲霉表达载体。利用该载体获得了D.cionopaga丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ黑曲霉转化子,应用亲和层析进行外源表达蛋白的大量制备,将能够对该酶结构和功能进行进一步的研究。

篇4：表达对公司感恩的演讲稿

◎宁静：我是心理咨询师，有事请留言。

咨询者：我是一个在校大学生，今年上大二。我家条件一般，因为我上学给家里的生活带来了一定的负担，每次放假回家妈妈都要以此来说我，说我只知道在学校里舒服。不知道家里人的苦；说要不是我，她那么大年纪还用在外面累死累活的么?我知道她说的是事实，可是我还是控制不住自己的情绪，什么都和妈妈对着干。

咨询者：现在妈妈和妹妹都在外打工，我已经好久没有和她们联系了，其实我真的好想她们，但每次打电话听见妈妈的语气就像是对一个陌生人说话一样。我的心就好痛，挂了电话后会哭好久。

咨询者：我知道我的脾气不好，似乎没有人能理解我，都说家是最好的避风港，现在放假我都不想回家了。

◎宁静：母亲是爱你的，妹妹是爱你的。她们把这份爱落实在行动上——累死累活地打工挣钱给你上学，希望你不负期望，好好学习，让她们的爱得到回报。然而，在你看来，这份爱太沉重了，让你感到太大的压力，所以你的情绪不好，和妈妈对着干。其实，你是知道妈妈和妹妹爱你。你不愿面对她们，是想回避这份因爱而带来的压力。对么?

咨询者：嗯，我现在最想的就是能早点工作，不要成为他们的负担，不想欠她们太多，可是我已经欠她们的了，一辈子也还不清了。暑假时我和妈妈她们一起工作了一个多月，就那短短的一个月我把和她们的关系处理得一团糟，如今已不是一句对不起能挽回的。有些伤是刻骨铭心的，现在只希望她们能原谅我。

◎宁静：把你的真实想法向母亲表达出来。我想她一定会原谅你的。

咨询者：嗯……

★★★★★★★★★★★★★★★★★★

咨询者：宁静老师，谢谢你上次的开导，后来我打电话给我妈妈了，感觉把话说开了真的心里好舒服呢!十月二十五号那天是我的生日，我妈妈还打电话给我，呵呵，这是我二十岁的生日，感觉是自己收获得最多的一个生日!

篇5：表达对母亲感恩的文章

那是一个严寒的冬天，老师给我们大家布置了一个特殊的作业。我的脑海里还清清楚楚的记得，老师当时意味深长的说：“同学们，你们已经十二岁了。爸爸妈妈已经养育了你们十二年，在这十二年了里，你们在成长，他们在养育你们的过程中也在成长。在这过程中有温暖，有辛酸。今天我给你们布置一个特殊的作业：回家后，给你们的爸爸或妈妈洗一次脚，在他们的耳边轻声说一声，‘我爱你’。”

教室里一片哗然，同学们都在小声的讨论着。而我却沉默不语，心想：给妈妈洗脚?曾经老师也布置过这个作业，我因不好意思而没有给妈妈洗，今天……

突然我的脑子里回想起妈妈对我的种种，老师刚才的话语，于是下定决心今天晚上一定要给妈妈洗脚。

晚上，看老妈心情不错。于是晚饭过后，我悄悄地来到卫生间。到水龙头那儿兑好水，端着洗脚盆来到妈妈面前。妈妈看着我有些莫名其妙，准备好了的话流利的从我的嘴里说出来“……总之千言万语汇成一句话：‘妈妈，我爱你’。”此时的妈妈已经被我感动的说不出话来。眼泪像断了线的珠子似的往下掉。我脱下妈妈的鞋子和袜子，刚要把妈妈的脚往水里放时，眼前的一幕把我惊呆了。天哪!这是妈妈的脚吗?脚上布满了老茧，这些老茧是妈妈辛苦赚钱努力奔波，为我们磨出来的啊!我哭了，苦的是那么痛。眼前的这一幕让我痛心，更让我为妈妈心痛。

篇6：对别人表达感恩的句子

1.愿你的事业蒸蒸日上，小日子过的想火鸡一样红红火火，不过在你最幸福的时候，千万不要忘记我哦。请我吃火鸡伴美酒吧。

2.雁过无痕，叶落无声，美丽是些详细而实在的东西，无处不在的守侯着你。感谢感动这个世界的魅力，感谢感动你的存在，感谢感动我们的相识。感恩节快乐。

3.有一种智慧叫舍得;有一种温情叫我懂;有一种情趣叫欣赏;有一种心胸叫宽容;有一种美好叫感恩。感恩节了，记得你的笑，记得你的好，祝你快乐又逍遥。

4.感恩的心中有对你的牵挂，感恩的心中有对你的关怀，感恩的心中有对天下所有人的问候，在这个特殊的日子里愿天下所有人开心快乐。

5.抬头看看天，它很宽广;低头看看地，它很坚实;感受周围的环境，它很温暖。而我们就在这美丽如春，温润如玉的时光中长大成长，感恩节到了，感谢这蕴育我们的天和地，这一切的一切。

6.让我怎样感谢你，当我走向你的时候，我原想收获一缕春风，你却给了我整个春天。滴水之恩，来日我当涌泉相报。还是祝你感恩节快乐吧。

7.大雪无痕，霜融无声，每当世界变得沉寂的时候，都有一丝莫名的感动，有一种感恩的冲动。我要真诚地感谢你一直以来对我的关心。祝你感恩节快乐。

8.朋友总是心连心，知心朋友值千金，灯光之下思贤友，小小讯儿传佳音，望有见讯如见人，时刻别忘朋友心。祝感恩节快乐。

9.说一声祝福在嘴上，传一句问候在网上，带着我的思念，带着我的心愿，带着我一起飞翔，飞向感恩的天空。祝感恩节快乐。

10.不论发生何事，在这个时候让我们身边多点赞美，感受生命的无限美好，相信别人，更加相信自己，让我们的生命充满阳光，祝感恩节快乐。

11.一直以来都听说外国人喜欢过一个节日叫做感恩节，今天又是感恩节了，我来凑个热闹，想来想去只有你是最值得感谢的人了，谢谢你我的好朋友。

12.祝福一缕缕，若溪水涓涓;情意达三江，如月辉漫漫。俊逸儒雅，明眸皓齿，藏我记忆深处。本梦醒，何曾忘却，感恩佳节，愿我们高山流水，相知永远。

13.您是园丁，为祖国山川添秀色;您如春雨，润育桃李，神州大地尽芳菲。在这感恩的节曰里，让我献上一支心灵的鲜花，向您表达衷心的祝愿。

14.你我两地相隔，思念和期待铸就了等待，在等待的日子里，我想对你说，谢谢你的爱，我会用我的全部感情来报答你，时间会去证明一切的。

15.常留一颗感恩的心，心留一份感激的情，无需海誓山盟，只需一条小小的短信儿，便再这感恩佳节表我真心，衷心地住你和你的家人感恩节快乐。

16.有阳光的地方就有我的笑容，有星星的地方就有我的眼睛。因为――你在哪里，我的心就在那里!祝你感恩节快乐。

17.爸爸妈妈，我长这么大，还老让你们为我担心，真是过意不去，往后的日子我会好好照顾自己，你们也要保重啊!祝二老感恩节快乐!

18.有人牵挂的漂泊不叫流浪;有人陪伴的哭泣不叫悲伤;有人分担的忧愁不叫痛苦;有人分享的快乐叫做幸福!谢谢你一路陪在我身旁!祝感恩节快乐!

19.当感谢代替了所有的语言世界将变成美丽的天堂，当关爱代替了所有的`行为人间将成为幸福的家园，感谢生命，感谢世界。

20.感谢你的关怀，感谢你的帮助，感谢你对我做的一切……在这个充满感恩之心的节日里，请接受我最真心的祝愿：一生平安如意健康快乐!

21.感谢你曾经爱过我，感谢你曾经恨过我，感谢你曾经骂过我，感谢你曾经出现在我的生活里，我的生命因你而精彩。

22.人总是容易在纷烦又平淡的生活中变得麻木，谢谢你的感恩节短信，让我知道在不远处还有人默默的关心着，也教会我以感恩的心对待生活!

23.快乐，感谢你给我永远珍视的记忆。在这个本身就值得感谢的日子里，想对你说：幸福每一天!

24.无论未来如何，我都要感激你，感激你来到我的生命中，带来了美丽欢愉，感激你给了我永恒器重的记忆，感恩节欢愉。

25.雁过无痕，叶落无声，美丽是些具体而实在的东西，无处不在的守侯着你。感激这个世界的魅力，感激你的存在，感激我们的相识。感恩节快乐!

26.最经典的问候是关怀，最经典的关怀是爱情，最经典的爱情是感激，最经典感激是眼泪，在这个感激满天飞舞的日子里，让短信带去我最真的问候。

27.把千言万语汇成一首歌，名字鸣做感谢感动，把千恩万谢编成一首诗，名字鸣做祝福，感谢老朋友多年关怀，祝福你永遥幸福。

28.有如从朔风凛冽的户外来到冬曰雪夜的炉边;老师，您的关怀，如这炉炭的殷红，给我无限温暖。我怎能不感谢您?

29.生活中因为有你而变得意义非凡，奋斗中因为有你而变得异常精彩，我用全部的努力向你表示感谢，感谢你对我的关怀。

30.因为能熟悉你而感到难忘，因为喜欢上你而感到快乐，会因为能得到你的爱而感到满意。祝你感恩节快乐!

31.感谢你陪我走过的每分每秒，因为有你，我不在觉得寂寥;感谢你愿意听我发牢骚，因为有你，我可以把不快通通除掉，我的生命里你不能少。

32.爱意犹如长流水，点点刻记在心头。成人路上唠叨多，岁月悠悠白发飘。感恩节来临雪花飞，我送妈妈鸭绒袄。祝福妈妈温暖又开心!

33.说一声祝福在嘴上，传一句问候在网上，带着我的思念，带着我的心愿，带着我一起飞翔，飞向感恩的天空!祝感恩节快乐!

34.因为您的一片爱心的灌浇，一番耕耘的辛劳，才会有桃李的绚丽，稻麦的金黄。愿我的谢意化成一束不凋的鲜花，给您的生活带来芬芳。

35.我的灵魂是您净化的，我的天空是你支撑的，老师我一定要给您一片蓝天。祝您幸福健康!

36.一个微笑，是对生活感恩;一句保重，是对自己感恩;一句没关系，是对失败感恩;一声问候，是对朋友感恩。心怀感恩，善待自己，预祝你感恩节快乐。

37.我痛苦的时候，你给了我安慰;迷茫的时候，你给了我指引;郁闷的时候，你给了我快乐。允许我以感恩的心为你祈福永远。

38.知道什么样的人最快乐吗?心怀感激快乐的人。所以我是快乐的感谢上帝让我拥有你这样的好朋友。不管冬日多寒冷，想到你就让我看到温暖的阳光。感恩节快乐。

39.这一刻，就让这条短信捎去我真心的祝福，点缀你那甜蜜的梦，笼罩在你的身边，愿你的生活多姿多彩，幸福快乐一辈子。

40.有阳光的地方就有我的笑容，有星星的地方就有我的眼睛。因为――你在哪里，我的心就在那里。祝你感恩节快乐。

41.风吹过的大地，浪洗过的海滩，云飞过的天空，你经过的地方，我用真心写下所有的感激，愿你开心每一天。感恩节快乐。

42.心存一份感动，因为真诚;心存一份美好，因为欣赏;心存一份平和，因为宽容;心存一份幸福，因为感恩;感恩节，感恩更是一份传递。祝你感恩节快乐。

43.每一年，感谢春夏秋冬的绚丽多彩;每一月，感谢月盈月昃的美好祝愿;每一天，感谢白昼黑夜的默默陪伴;每一刻，感谢你的关心无限。感恩节快乐。

44.感谢太阳给我温暖，感谢月亮给我安详，感谢大海给我心胸，感谢山峦给我力量，我要感谢正在看短信的你，因为你给了我生命的分享。感恩节快乐。

45.我愿化作南飞的大雁，与你排成“一”字共同飞翔;我愿化作冬日的暖阳，给你希望;感恩节了，我愿化作油腻的火鸡，给你品尝。嗨别做梦了，有那口福吗?

46.你我两地相隔，思念和期待铸就了等待，在等待的日子里，我要对你说，谢谢你的爱，我要用我的全部感情来报答你，时间能证明一切。

47.甜蜜的爱情，温馨的亲情，真挚的友情，当我拥有这三种感情，我将是这世界上最幸福的人，拥有你们的爱，我的面前，不再有荆棘，不再有阻碍，感谢你们。

48.感恩节来临，该感恩的感恩，不该感恩的把感情培养深;该祝福的祝福，不该祝福的藏在心底在乎;该表达的表达，不该表达的发短信送牵挂;该微笑的微笑，不微笑的会后悔，这条短信要收费。

篇7：对别人表达感恩的句子

2、感谢姐妹，帮助引导我健康成长，支持我走过青涩岁月，扶持我完成学业，在我困难的时候，伸出她们温情的手。

3、感谢上天赐予空气，让我生存;感谢上天给予食物，让我健康;最重要的是感谢上天把你赐予了我，让我永远幸福!

4、节日有不同，感恩无国界。今天虽是外国节日，但遇见您是我最大的财富，您的真心关怀让我也懂得了付出。感恩节幸福!

5、朋友总是心连心，知心朋友值千金，灯光之下思贤友，小小讯儿传佳音，望有见讯如见人，时刻别忘朋友心。祝感恩节快乐。

6、今天过得好吗?想念你的心在每丝雨中飘舞，什么时候才能停靠，我不知道?你知道吗?放我真心在你手中，请保管好它好吗?

7、一万次的空想，比不上一次行动;再大的谢意，比不上一丁点实质性的回报;感恩是心头的一枚邮票，只有用行动传递，才真实而美丽。

8、因为有你，人生之路不在孤单，因为有你，难言心事可以倾诉，因为有你，陪我体会酸甜苦辣。亲爱的，感恩节到了，为你送上我深深的祝福!

9、你是我见过最美丽的树叶，让我的森林为你凋谢;你像一首旋律让我的生命多和谐，我只能用小小声音说感谢，小到只有你能了解!感恩节快乐!

10、有种心情，天天传递，却依然纯朴;有种经历，普普通通，却依然怀念，有种问候，清清淡淡，却尤其真诚;有种友谊，无须牵挂，却心领神会!

11、怀一颗想念之心，春夏秋冬不凋;怀一颗祝福之心，每时每刻不减;怀一颗平常之心，荣辱风霜不变;怀一颗感恩之心，天长地久祝愿，感恩节快乐!

12、你灿烂的笑容照亮了我简单的生活，你真心的关怀让我懂得了爱的真谛，你热情的帮助让我明白了生活的意义，感谢你我亲爱的朋友!祝感恩节快乐!

13、轻轻的，立夏走了，正如小满悄悄的来;深深的，祝福来了，正如朋友浓浓的爱。别因太多的忙碌冷淡温柔，莫因无止的追求淹没享受。愿快乐满怀!

14、我用手指按键，让真心达到心的最顶端，让诚意爬上笑脸，然后把我对你的感谢之情写入字里，变成短信，在感恩节这一天给你的快乐增加更多快乐。

15、没办法忘记你的坏你的好，你的微笑你的胡闹，你默默关怀时的体贴，你看见香蕉时的傻笑，感恩节，想对你说谢谢小猴，过去给我带来的快乐和幸福。

16、神说：幸福是有一颗感恩的心，一位忠诚的爱人，一个健康的身体，一帮信赖的朋友。当你收到此信息，一切将随之拥有!怀着感恩的心，你会幸福快乐!

17、祝福一缕缕，若溪水涓涓;情意达三江，如月辉漫漫。俊逸儒雅，明眸皓齿，藏我记忆深处。本梦醒，何曾忘却，感恩佳节，愿我们高山流水，相知永远。

18、忙忙碌碌的人生，四处飘零;愁烦的心绪，久不能平;朋友的情谊，好似香茗;人生的路上，风雨同行。感恩节到了，感谢朋友珍贵的情谊，愿你一生顺利。

19、我用真心撰写了这条短信，除了要预祝你感恩节快乐以外，还有一个目的就是：今天，我把短信发给大家，到了感恩节那天，我就会收到很多的感恩节短信了。

篇8：对聚焦文章表达方式的思考

本次青年教师赛课高年级段共有5节。五位教师采取“同课异构”的方式展开PK。从评比的角度看, 比较科学, 也易于比较。我们听课的教师虽然一整天都在听《大江保卫战》第一课时, 但是丝毫没有感到无聊和乏味, 相反激起了思考和兴趣。比赛呈现出“同而不同”, 除了教学内容相同, 每一个选手的教学设计不同, 对文本的思考不同, 课堂关注的角度不同, 学生的学情也不同, 课堂上的生成和精彩都不同。这么多不同就是引起听课者兴趣的原因。下面我从“同而不同”的角度谈谈我的思考和听课感受。

一、训练扎实, 注重读书和写字, 夯实学生的基本功

五位教师在《大江保卫战》第一课时当中, 都注重听、说、读、写的基本训练。比如说, 读的方面, 虽然读的时机和重点不同, 但是对课文的整体阅读每个参赛者都予以重视, 扎扎实实读书, 肯花时间读书。课堂中呈现了学生自由读、带着问题读、体会读等多种方式。再比如, 在写字方面, 每个参赛者都比较重视。孙老师用课件演示“兼”和“魄”的笔顺和结构特点;陈老师亲自书写“兼”, 还提醒学生注意书写的要求, 展示学生写的字;曹老师别出心裁地在课堂最后听写生字, 既考查了学生生字掌握的情况, 又提醒了学生注意书写的要求。总之, 在第一课时上, 每个执教教师基本能达到教学目标, 基础知识训练扎实有效。但是我认为在写字这一块, 所有执教者的时间都不够, 显得仓促。上午执教的三位教师把写字这块都放在教学的开头, 花了一定的时间, 可是挤压了后面对文本的理解时间, 以至于个别教师拖课, 导致学生对文本理解不够深入, 有浅尝辄止之嫌。下午的两位执教教师, 对高年级课堂的理解与上午的不同, 花较多时间在文本的理解和文本的表达上, 可是学生写字的时间又得不到保障, 有点遗憾。这个问题曾经一直困扰着我。但是自从我认真研读了新课程标准以及听了一些老师的讲座后, 我意识到, 高年级语文写字的时机和侧重点要求与低中年级是不一样的。高年级写字指导要侧重于行款书写。高林生老师在第四届课堂大赛上点评时说, 第三学段, 学生要能用硬笔书写楷书, 行款整齐, 力求美观。中高年级写字不能低龄化, 中高年级, 不能单纯是一个字一个字地教, 要注意行款。第一课时肯定要写字, 这点不能丢掉, 但是要合理考虑写字的时机、重点以及所花的时间。对于这点, 我想所有的高年级段的语文教师都应深入思考。

二、关注文体特点, 聚焦文章表达方式, 提高学生的表达能力

《大江保卫战》是一篇感人肺腑、气壮山河的通讯, 和前边学的《梦圆飞天》是同一种文体。通讯是记叙文的一种, 是报纸、广播电台、通讯社常用的文体。它是运用叙述、描写、抒情、议论等多种手法, 具体、生动、形象地反映新闻事件或典型人物的一种新闻报道形式。通观《大江保卫战》, 题目铿锵有力, 催人奋进, 有感染力, 属于记事通讯。课文完整地展现了通讯稿的六个要素。文章最值得关注的有以下三点:一是点面结合的写法, 既有对人民子弟兵整体形象的描述, 又有对黄晓文这样的典型人物的塑造, 这种文体的写法很值得学生学习, 这也是编者的意图之一。二是比拟、排比、对仗等表现手法的丰富性值得学习。在课文的第一自然段和第五自然段表现得尤为突出, 应该引起教师的关注。三是这篇通讯稿综合运用记叙、描写、抒情等多种表现手法塑造出人民子弟兵可爱可敬的形象。我想, 在第一课时里面, 谁能最大限度地突出这三点, 谁能非常准确地把握第一课时的教学目标 (即教什么) , 谁能抓住这三点中的一两点来强调或指导学生关注文章的表达方式, 那么谁就抓住了评判教学效果优劣的标准之一。当然, 一篇课文要教会学生的东西不可能一堂课来完成, 通讯稿的诸多特点和鲜明写作特色也不需要面面俱到地告诉学生, 但是每节课教什么一定要清楚, 仅仅满足于听说、读、写任务的完成是不够的, 要把对文本的理解合理地分配到每一节课上, 使课堂既有基本知识的掌握, 也有基本能力的训练。高年级课堂更多的是要引导学生关注文本的表达。入选教材的每篇课文, 都承载着某些任务, 都是学生学习祖国语言文字的运用, 感受母语的魅力, 接受情感、态度、价值观教育的载体。语文教师要做的事就是深入研读文本, 挖掘每篇课文、每节课要教什么, 怎样教, 也就是要在小学语文教学行为向度和目标达成策略上做出努力。

基于以上思考, 再来看五位教师的课堂教学就明朗了许多, 就能不容置疑地看出曹老师在关注文本表达上用功最大、最多, 效果最好。不可否认, 五位教师都聚焦了文本的表达方式, 都注意了第一自然段和第五自然段的写法, 但是关注的程度不同。蜻蜓点水是关注, 浓墨重彩也是关注。曹老师聚焦表达的时候更实在、更到位。在第一自然段中, 五位教师都抓住“万分危急”这个词, 让学生找一找课文从哪几个方面写出了“急”?其实, 文章写“三个急”的写作方式是不一样的, 不能仅仅让学生知道写出了“雨水急”“城市告急”和“子弟兵急”这三个方面, 而且还要深入研究文本的展现方式的不同。曹老师很好地注意到了这点, 她引导学生找出之后, 反复读, 反复体会写法的不同, 学生在语句的比较当中发现, 为了突出“急”作者采取了比喻、标点和短语突出的方式, 都是“急”, 可表达的方式不一样。教师这样做, 就可以让学生掌握“围绕一个中心, 写好几个方面, 采取不同写法”的写作方法。在聚焦课文第五自然段时, 曹老师更是花了大力气来研读, 课堂与众不同, 令人耳目一新。在教学中, 曹老师首先提醒学生, 课文第五自然段是很有特点的一段, 仔细读一读, 看看发现有什么特点。教师接着出示了第五自然段:“汹涌的激流中, 战士们的冲锋舟劈波斩浪, 飞向漂动的树梢, 飞向灭顶的房屋, 飞向摇摇欲坠的电杆……哪里有洪水, 哪里就有军旗飘扬;哪里有危险, 哪里就有军徽闪烁。滔滔洪水中的群众, 看到了红五星, 看到了迷彩服, 就像看到了他们的大救星。”学生经过反复地读, 在交流中有人说出了这段中有排比句, 三个“飞向”很明显, 教师抓住时机, 引导学生读句子, 还找出了另一个排比句, 三个“看到了”。排比句找出来之后让学生体会这样写的好处是什么, 帮助学生理解文章极富感染力的表达方式。学生以为“哪里有洪水, 哪里就有军旗飘扬;哪里有危险, 哪里就有军徽闪烁”是排比, 教师直接告诉学生这是对偶, 也就是对仗的手法, 其目的也是增强语言的感染力。教师没有就此停住, 而是进一步追问这段写什么, 学生答写救人。教师引导学生关注到这段中出现“救”这个字并不多, 然后一句一句引导学生感受各种写法的不同。三个“飞向”指出了在哪儿救人。“在安造垸, 他们救出了被洪水围困了三天三夜的幼儿园老师周运兰;在洲湾, 他们给攀上树梢等待了近九个小时的小江珊以生的希望。……”写出了救了什么人。“哪里有洪水, 哪里就有军旗飘扬;哪里有危险, 哪里就有军徽闪烁。”写出了救人的身影无处不在。三个“看到了”写出了人物身上的标志也可代替人物本身, 写出了群众对救星的信赖。教师不厌其烦地引导学生读, 还把这段文字改成填空题, 要求学生去背诵, 这样做只有一个目的, 就是让学生学习作者这种运用多种多样的语言表达技巧, 感受通讯稿用上这些表现方法后所展现的语言魅力多么强, 在今后的写作中可加以借鉴。此外, 在读书中, 曹老师还相机介绍了通讯稿的一般特点:真实准确, 语言富有感染力。曹老师对文本的理解和把握, 对我们所有高年级段语文教师都很有启发。