泻痢消丸中盐酸小檗碱含量的测定

泻痢消丸是复方制剂, 具有清热燥湿、行气止痛、化浊止痢之功效。用于急性肠炎、结肠炎、痢疾等症的治疗。为控制其内在质量, 我们对其采用高效液相色谱法对盐酸小檗碱进行了含量测定及相应的方法学考察。

1 含量测定[1]

1.1 溶液的制备和测定

1.1.1 对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量, 加甲醇定容至刻度, 摇匀, 制成每1m L含0.08mg的溶液, 备用。

1.1.2 供试品溶液的制备

取样品10丸, 研细, 取约0.3g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇-盐酸 (100∶1) 溶液50m L, 密塞, 称定重量, 置60℃水浴中温浸30min, 超声处理1h, 放冷, 再称定重量, 用甲醇-盐酸 (100∶1) 溶液补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液5m L, 置10m L量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得。

1.1.3 阴性对照品溶液的制备按处方比例, 取缺黄连的样品约0.3g, 精密称定, 按“1. 1.2”项下的方法操作, 制备阴性对照品溶液。

1.1.4 测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL, 注入高效液相色谱仪, 测定, 即得。

1.1.5 色谱条件及系统适应性实验

用十八烷基键合硅胶为填充剂;乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾 (25∶75) 为流动相;检测波长为345nm;柱温:40.0℃;流量:1.0m L/min;理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。

1.2 方法学考察及结果

1.2.1 标准曲线的绘制

精密称取盐酸小檗碱对照品适量, 加甲醇制成每1m L含0.08mg的溶液, 精密吸取此溶液各5、7.5、10、12.5、15μL分别注入液相色谱仪, 测定。以进样量为横坐标, 以峰面积值为纵坐标作图, 得一条近似通过原点的直线, 回归方程为:Y=2 531380X-50594.92, r=0.9994。结果表明, 盐酸小檗碱进样量在0.4~1.2μg之间, 进样量与峰面积值呈良好的线性关系。

1.2.2 稳定性考察

分别取放置4、8、12、16、20、24h的供试品溶液, 测定泻痢消丸中盐酸小檗碱的含量, 以考察其稳定性。RSD值为1.24%, 表明供试品溶液至少在24h内稳定。

1.2.3 精密度考察

吸取同一供试品溶液, 重复进样6次, 计算相对标准偏差, 则盐酸小檗碱的RSD为0.85%, 表明仪器精密度良好。

1.2.4 重现性试验

取样品内容物粉末6份, 每份3.0g, 精密称定, 按“1.1.2”项下“供试品溶液的制备”方法操作。吸取供试液和对照液各10μL, 注入高效液相色谱仪, 测定样品中盐酸小檗碱的含量。结果样品中盐酸小檗碱的平均含量为18.34 mg/g, RSD值为0.85%。

1.2.5 回收率的测定

精密称取盐酸小檗碱对照品适量, 加入到已知盐酸小檗碱含量的泻痢消丸 (批号20041201, 丸中盐酸小檗碱含量为18.34mg/g, 详见重现性实验) 中, 按“含量测定”项下方法操作, 制备供试品溶液, 测定泻痢消丸中盐酸小檗碱的含量, 计算回收率。

1.2.6 盐酸小檗碱含量测定

精密吸取“1.1.1”项下对照品溶液和“1.1.2”项下供试品溶液各10μL, 注入高效液相色谱仪, 进行测定, 计算样品中盐酸小檗碱的含量。

1.2.7 阴性干扰试验

取“1.1.3”项下的阴性对照品溶液, 按样品中盐酸小檗碱含量测定项下的方法进行测定。结果供试品色谱图中, 在与盐酸小檗碱对照品色谱峰相应的位置上, 没有色谱峰出现, 表明处方中其他药味对其测定无干扰。

2 讨论

高效液相色谱法测定黄连中盐酸小檗碱含量时, 曾采用0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液与乙腈的混合溶液, 发现磷酸二氢钾溶液的浓度较高时, 容易发生阻塞, 原因是磷酸二氢钾为缓冲盐溶液, 盐类易溶于水, 而遇到乙腈等有机溶剂则析出结晶而阻塞, 致使压力升高, 仪器不能正常运转。经试验发现, 磷酸二氢钾溶液浓度低于0.05mol/L, 乙腈的比例不超过30%时, 不会发生阻塞现象。后经多次试验, 采用本法测定, 色谱峰峰形良好, 分离度达到要求 (>1.5) , 故列入正文。

摘要：目的 完善泻痢消丸的质量标准。方法 采用高效液相色谱法测定泻痢消丸中盐酸小檗碱的含量。结果 定性定量方法简便、准确、专属性强、重现性好。结论 改进后的质量标准可有效控制本制剂的内在质量。

关键词：泻痢消丸,高效液相色谱法,盐酸小檗碱

参考文献

[1] 国家药典委员会.中国药典 (一部) [S].北京:化学工业出版社, 2005:118, 213～214, 68, 166, 118.