口腔微生态环境论文提纲

2022-11-15

论文题目：食管鳞状细胞癌患者口腔内唾液菌群分析及其临床意义

摘要：背景与目的食管癌是全球第九大常见癌症,也是世界上第六大癌症相关性死亡原因。食管鳞癌约占食管癌总发病率的90%,中国约占全球食管癌总发病率的50%。既往研究证实吸烟与饮酒与食管鳞癌发生风险呈正相关。但最近来自中国、印度、伊朗等几个食管癌高发地区及包括拉丁美洲和日本在内等其他地区的研究发现人口腔卫生不良等指标与食管鳞癌之间存在关联。随着微生态研究的兴起和发展,口腔细菌及微生态环境失平衡与食管鳞癌之间的关系是值得研究的课题。口腔细菌可能通过直接代谢生成化学致癌物和致炎因子在癌症和其他慢性病中发挥致病作用。已有研究报道牙齿脱落和口腔卫生不良与上消化道癌密切相关,表明口腔微生物在上消化道癌症发生发展中的可能作用。而唾液是口腔菌群定殖的主要来源。因此,本研究中,我们采用高通量测序技术对食管鳞癌患者唾液菌群进行多样性研究,探讨食管鳞状细胞癌与唾液菌群的关系,筛选出食管鳞癌患者特异性表达的细菌,旨在为食管鳞癌的早期筛查提供简便无创方法。方法选择就诊于广东省人民医院（广东省医学科学院）伟伦消化内镜中心的病人,分别收集食管鳞癌（ESCC组）患者唾液50例和健康对照者（HC组）唾液40例。经病理活检证实所有食管癌患者均为食管鳞癌,并且不伴有其他影响唾液菌群的系统性疾病,如糖尿病、肝炎、脂肪肝等。使用购自美国MOBIO公司的试剂盒提取唾液DNA,用PCR扩增16S rDNAV4区,进行高通量测序,然后按照标准流程进行建库,随后将建立好的扩增子文库在Illumina Hiseq2500 PE250测序平台进行测序。最后将测序数据进行OUT聚类后进行分析,包括物种注释、Alpha多样性分析、Beta多样性分析及LEfSe分析等,筛选出靶细菌,最后采用绝对定量PCR方法分别在58例食管鳞癌患者和46例健康对照者对靶细菌进行验证。结果多样性分析表明ESCC组和HC组整体唾液菌群的多样性方面差异较小（P＞0.05）,物种分析表明与HC组相比,ESCC组的梭杆菌属、卟啉单胞菌属、链球菌属的比例较高（比例分别为:11.1%、6.9%、5.8%）,而普雷沃菌属比例显著降低（比例为1.3%）,HC组梭杆菌属、卟啉单胞菌属、链球菌属的比例较低（比例分别为:6.1%、4.8%、2.9%）,而普雷沃菌属比例显著升高（比例为13.6%）。LEfSe分析表明ESCC组卟啉菌属、梭杆菌属及链球菌属均表达升高,且具有统计学差异（P＞0.05）。我们采用绝对定量PCR方法对唾液DNA中的牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌及唾液链球菌进行验证,经统计学检验,ESCC组患者唾液牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌及唾液链球菌的检出量明显比健康对照组高（P＜0.05）。我们根据唾液样本中的牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌、唾液链球菌的拷贝量以及这三个菌联合绘制ROC曲线,AUC分别为:60%、60.1%、78.9%、71.1%,灵敏度分别为:32.7%、56.9%、81%、69%,特异度分别为:93.4%、63%、76.1%、65.2%。将这三个菌拷贝量联合其他指标（吸烟、饮酒、喜烫食、居住地（潮汕和非潮汕）、性别、年龄等指标）绘制ROC曲线,AUC分别为94.5%、93%、93.4%、94.5%,灵敏度分别为:86.2%、96.6%、86.2%、86.2%,特异度分别为:91.3%、78.3%、84.8%、93.5%。结论1.与健康人相比,食管鳞状细胞癌患者唾液具有特征性的菌群,包括卟啉菌属、梭杆菌属及链球菌属。2.与健康人相比,食管鳞状细胞患者唾液中牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌及唾液链球菌的表达量明显增高。3.吸烟、饮酒、喜烫食、居住地（潮汕和非潮汕）、性别、年龄等指标结合牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌、唾液链球菌的拷贝数可以提高对食管鳞癌的预测诊断价值。

关键词：食管鳞癌;口腔唾液菌群;高通量测序;Q-PCR

学科专业：内科学（消化系病）（专业学位）

摘要

ABSTRACT

前言

一、食管癌流行病学调查和危险因素分析

二、人体消化道微生态学

三、微生态与食管癌

四、高通量测序

第一章食管鳞癌患者与健康对照者唾液菌群对比分析

(一) 材料与方法

(二) 结果