石油论文提纲

论文题目：石油降解菌的分离及其降解条件优化和应用

摘要：石油是一种复杂的混合物,具有致畸、致癌、致突变效应,进入土壤后会导致土壤出现板结、沥青化和养分失衡。因此石油污染的修复一直是环境科学领域重要的研究问题,其中微生物修复被认为是一种相对经济和生态友好的修复方式,为此本研究旨在从石油污染土壤中分离出高效石油降解菌,优化其降解石油烃的条件;同时探讨其降解石油烃的机理;最后将其应用于石油污染土壤的修复中,为石油污染的微生物修复提供菌种资源和理论依据。主要获得以下结论:（1）获得了7株石油降解率大于30%的石油降解菌,选择其中三种（Acinetobacter sp.Y183,Pseudomonas sp.Y187和Bacillus sp.N47）优化其石油烃降解条件。Acinetobacter sp.Y183最适生长条件温度30℃,Na Cl含量0 g/L,p H=8,石油浓度10 g/L,最适氮源为1 g/L氯化铵;通过条件优化将其石油降解量从10天降解1.047 g提升到5天降解3.231 g。Pseudomonas sp.Y187,最适生长条件温度30℃,Na Cl含量0 g/L,p H=8,石油浓度50 g/L,最适氮源为0.5 g/L硝酸铵;通过条件优化将其石油降解量从10天降解0.912 g提升到5天降解8.987 g。Bacillus sp.N47,最适生长条件温度30℃,Na Cl含量20 g/L,p H=8,石油浓度30 g/L,最适氮源为4 g/L硝酸铵;通过条件优化将其石油降解量从10天降解1.470 g提升到5天降解2.149 g。（2）对以上三种菌株进行石油烃降解机理初步探讨,通过驱油试验发现Pseudomonas sp.Y187能产生物表面活性剂,利用薄层分析检测发现该生物表面活性剂的类型为脂肽型。通过对石油烃相关降解基因进行扩增,发现Pseudomonas sp.Y187含有环羟基化双加氧酶基因（RHDα）和苯甲酸1,2-双加氧酶基因（ben A）;Bacillus sp.N47含有烷烃加氧酶基因（alk B）和烷烃羟化酶基因（alk Bw）。而Acinetobacter sp.Y183未发现有相关降解基因。（3）选择上述三株菌,设置8个组合菌株处理,研究其对石油污染土壤中石油烃的降解能力。研究结果发现,与空白对照相比,单独添加菌株N47或者Y187均能将石油烃的降解时间由75天缩短至14天;添加复合菌株Y187和Y183,可以将石油烃的降解时间由75天缩短至30天;添加复合菌株N47和Y183,可以将石油烃的降解率从7.26%提高至9.65%综上所述,本研究获得的三株石油烃降解菌在石油污染修复中具有重要的应用价值,尤其是Pseudomonas sp.Y187和Bacillus sp.N47,具有较强的驱油能力及石油烃污染修复能力。因此,本研究为石油污染的修复提供了具有重要的菌源及理论支撑。

关键词：石油污染;石油降解菌;条件优化;生物表面活性剂;微生物修复

学科专业：农业硕士（专业学位）

摘要

ABSTRACT

第一章 文献综述

1.1 石油污染现状及危害

1.1.1 石油污染现状

1.1.2 石油污染的危害

1.2 石油污染的微生物修复

1.2.1 石油烃降解微生物的种类

1.2.2 微生物降解石油烃的机理

1.3 微生物修复石油污染的影响因素

1.3.1 温度

1.3.2 pH

1.3.3 含盐量

1.3.4 营养条件

1.3.5 其它条件

1.4 研究目的及意义

1.5 研究内容与技术路线

1.5.1 研究内容

1.5.2 技术路线

第二章 石油降解菌的筛选与鉴定

2.1 前言

2.2 试验方案

2.2.1 石油污染土壤的采集

2.2.2 土壤中总石油烃的测定

2.2.3 石油降解菌的分离

2.2.4 石油降解率的测定

2.2.5 石油降解菌的分子生物学鉴定及系统发育树构建

2.3 数据处理

2.4 结果与分析

2.4.1 土壤中总石油烃含量

2.4.2 石油降解菌的筛选

2.4.3 石油降解菌的鉴定与系统发育树构建

2.5 讨论

2.6 小结

第三章 菌株的石油烃降解条件优化

3.1 前言

3.2 试验方案

3.2.1 接种液的配置

3.2.2 生长曲线

3.2.3 不同条件的设置

3.3 数据处理

3.4 结果与分析

3.4.1 生长曲线

3.4.2 不同pH对微生物生长的影响

3.4.3 不同温度对微生物生长的影响

3.4.4 不同含盐量对微生物生长的影响

3.4.5 不同石油浓度对微生物生长的影响

3.4.6 不同氮源和浓度对微生物生长的影响

3.5 讨论

3.6 小结

第四章 石油降解菌的降解机理探究

4.1 前言

4.2 试验方案

4.2.1 产表面活性剂菌的鉴定

4.2.2 表面活性剂的提取与鉴定

4.2.3 石油降解基因的鉴定

4.3 数据处理

4.4 结果与分析

4.4.1 产表面活性剂菌鉴定结果

4.4.2 表面活性剂鉴定结果

4.4.3 石油降解功能基因鉴定

4.5 讨论

4.5.1 菌株产表面活性剂的鉴定

4.5.2 石油降解基因的检测

4.6 小结

第五章 石油烃降解菌对石油污染土壤的修复

5.1 前言

5.2 试验方案

5.2.1 复合菌株的构建

5.2.2 室内培养试验

5.2.3 测定指标

5.3 数据处理

5.4 结果与分析

5.4.1 土壤中总石油烃的降解率

5.4.2 菌株对总石油烃降解量的贡献度

5.4.3 总石油烃降解率和修复时间关系的拟合

5.5 讨论

5.6 小结

第六章 结论与展望

6.1 主要结论

6.2 主要创新点

6.3 研究展望

参考文献

致谢