水处理生物学论文提纲

论文题目：大豆多肽Lunasin积累及其外源表达的研究

摘要：Lunasin是一种大豆生物活性肽,具有抗氧化,抗炎、抗癌及降低体内胆固醇等生物活性。但Lunasin在大豆中含量较低,约为0.5～1.2 mg/g,且提取纯化复杂,使得Lunasin在工业化生产及商业化利用难以实现。本论文从大豆发芽积累Lunasin的影响因素、Lunasin功能活性以及Lunasin肽在谷子中表达三方面进行研究,以期为Lunasin的生产应用奠定基础。首先,研究了在大豆发芽过程中,发芽温度、发芽时间以及Na Cl的浓度对Lunasin积累的影响。采用Western blot和酶联免疫对豆芽中Lunasin含量进行测定。结果表明,Na Cl胁迫大豆发芽Lunasin积累最佳条件为:Na Cl浓度为50 m M,发芽时间为6 h,发芽温度为25℃,在此条件下豆芽中Lunasin含量为2.34 mg/g。其次,研究了Lunasin肽的生物活性。（1）采用ABTS和DPPH自由基清除实验评价Lunasin纯提物的抗氧化活性。结果表明,在浓度0.125～1 mg/m L范围内,未发芽组、水处理组和盐处理组的自由基清除活性均呈剂量依赖性关系,盐处理组的自由基清除活性显著高于水处理组和未发芽组。（2）在小鼠RAW264.7巨噬细胞NO测定中,盐处理组、水处理组和未发芽组均显著抑制NO在培养基中的积累,且呈剂量依赖关系。当浓度为2 mg/m L时,盐处理组的抑制率（70.2%）明显高于水处理组（58.4%）和未发芽组（51.9%）。此外,Lunasin纯提物能抑制脂多糖诱导一氧化氮合酶（NOS）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因的表达,抑制作用:盐处理组＞水处理组。（3）测定了Lunasin对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的毒性作用和抗增殖作用。细胞毒性实验结果表明,未发芽组、水处理组和盐处理在0.5～2 mg/m L浓度范围内对MDA-MB-231细胞无细胞毒作用。在抗增殖实验中,未发芽组、水处理组和盐处理组对MDA-MB-231细胞的增殖均有较高的抑制作用。在2 mg/m L浓度下,盐处理组对细胞增殖的抑制率（69%）明显高于水处理组（52%）和未发芽组（37%）。最后,以谷子为植物表达系统,外源表达Lunasin肽并对其生物学活性进行了表征。采用农杆菌介导转化法,获得Lunasin谷子转基因植株,Western-blot结果表明,Lunasin肽在转基因谷子中成功表达。ABTS和DPPH自由基清除活性检测显示转基因型（转Lunasin谷子中Lunasin肽富集物）的清除自由基能力显著高于野生型（野生型谷子中多肽富集物）。Lunasin降脂活性分析表明,相比于野生型,转基因型能够更好的抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,减少分化过程中油脂的堆积。同时,转基因型对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制率也高于野生型。

关键词：Lunasin;大豆发芽;盐胁迫;生物活性;转基因谷子

学科专业：食品科学与工程

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论

1.1 Lunasin的结构及功能

1.2 Lunasin的纯化及提取方法

1.3 Lunasin的生物活性研究进展

1.4 天然植物中Lunasin的含量及其积累的研究现状

1.4.1 天然植物中Lunasin的含量

1.4.2 Lunasin的积累的研究现状

1.5 本研究的意义及主要内容

1.5.1 研究意义

1.5.2 主要内容

第2章 NaCl刺激对大豆萌发过程中Lunasin积累的研究

2.1 前言

2.2 材料与设备

2.2.1 材料与试剂

2.2.2 仪器与设备

2.3 实验方法

2.3.1 大豆发芽实验

2.3.2 Lunasin提取及纯化

2.3.3 高效液相色谱-质谱串联分析

2.3.4 Western Blot检测蛋白表达

2.3.5 酶联免疫分析测定

2.3.6 数据处理

2.4 结果与讨论

2.4.1 发芽时间对发芽大豆中Lunasin含量的影响

2.4.2 温度对发芽大豆中Lunasin含量的影响

2.4.3 Na Cl浓度对发芽大豆中Lunasin含量的影响

2.4.4 Lunasin质谱分析

2.5 本章小结

第3章 NaCl刺激积累的Lunasin活性研究

3.1 前言

3.2 材料与设备

3.2.1 材料与试剂

3.2.2 仪器与设备

3.3 实验方法

3.3.1 抗氧化活性测定

3.3.2 RAW264.7细胞培养

3.3.3 RAW264.7细胞毒性实验

3.3.4 RAW264.7细胞活性实验

3.3.5 MDA-MB-231细胞活性实验

3.3.6 数据处理

3.4 结果与讨论

3.4.1 抗氧化活性分析

3.4.2 抗炎活性分析

3.4.3 抗癌活性分析

3.5 本章小结

第4章 Lunasin在谷子中的表达积累及活性研究

4.1 前言

4.2 材料与设备

4.2.1 材料与试剂

4.2.2 仪器与设备

4.3 实验方法

4.3.1 质粒构建

4.3.2 农杆菌电击转化

4.3.3 谷子遗传转化

4.3.4 转基因谷子DNA鉴定

4.3.5 抗氧化活性实验

4.3.6 3T3-L1脂肪细胞活性实验

4.3.7 人乳腺癌MDA-MB-231活性实验

4.3.8 统计分析

4.4 结果与讨论

4.4.1 Lunasin转基因植株的鉴定

4.4.2 抗氧化活性分析

4.4.3 降脂活性分析

4.4.4 抗癌活性分析

4.5 本章小结

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2 创新点

5.3 展望

参考文献

致谢

二、其它科研成果