青苹果竹芋的离体培养与快速繁殖技术研究

青苹果竹芋的离体培养与快速繁殖技术研究（共5篇）

篇1：青苹果竹芋的离体培养与快速繁殖技术研究

青苹果竹芋的离体培养与快速繁殖技术研究

以青苹果竹芋带节的.茎段作为外植体材料进行离体快繁研究,结果表明:芽启动诱导培养基以MS+6-BA(2.00 mg・L-1)+NAA(0.20 mg・L-1)为宜,增殖培养基以MS+6-BA(2.00 mg・L-1)+NAA(0.02 mg・L-1)为宜,青苹果竹芋无需生根培养即可获得较为健壮的小苗,移栽成活率可达95%以上.

作 者：尹芳 朱俊华 王华岳 Yin Fang Zhu Junhua Wang Huayue 作者单位：北京城市学院,北京,100094刊 名：北京城市学院学报英文刊名：JOURNAL OF BEIJING CITY UNIVERSITY年，卷(期)：“”(2)分类号：Q81关键词：青苹果竹芋 离体培养 快速繁殖

篇2：青苹果竹芋的离体培养与快速繁殖技术研究

1植物名称红润楠(Machilus thunbergii Sieb.et Zucc.),别名红楠、小楠木、猪脚楠. 2材料类别顶芽和带腋芽的`茎段.

作 者：陈家龙 郑泉 王广东 郭维明 郑勇平CHEN Jia-Long ZHENG Quan WANG Guang-Dong GUO Wei-Ming ZHENG Yong-Ping 作者单位：陈家龙,郑泉,王广东,郭维明,CHEN Jia-Long,ZHENG Quan,WANG Guang-Dong,GUO Wei-Ming(南京农业大学园艺学院,南京,210095)

郑勇平,ZHENG Yong-Ping(浙江森禾种业股份有限公司,杭州,310021)

篇3：南美叉柱花的离体培养与快速繁殖

关键词：叉柱花,组织培养,快速繁殖

观赏水草在水族箱中有着重要的地位, 随着人们对水草的喜爱, 已经发展成为以水草为主的观赏水族箱[1]。南美叉柱花 (Staurogyne repens) , 也称叉柱花, 是一种双子叶植物, 属于爵床科叉柱花属, 分布于巴西、委内瑞拉等地, 虽然近年来才刚刚引入我国, 但是得到市场的认可, 市场上往往供不应求。南美叉柱花的繁殖主要依靠对成年的匍匐茎进行分株, 繁殖系数较低, 同时成本较高。其属于短日照植物, 在每年11月以后常常开花, 引起植物早衰, 叶片变黄, 失去欣赏价值, 不仅导致经济价值下降, 而且在秋冬季节市场上产品缺乏。随着生物技术的发展, 特别是植物组织培养技术的日趋成熟, 利用植物工厂生产花卉, 果树等的种苗已经广泛应用, 比如香蕉[2]、番木瓜[3]、蝴蝶兰[4]、杨树[5]、铁皮石斛[6]等。近年来一些观赏水草如水榕[7,8]、红椒[9]、绿椒[10]、皇冠[11,12]、红波[13]等也已经成功建立了组织培养技术体系, 有些品种开展了工厂化育苗, 但是还没有工厂化生产叉柱花的报道。组织培养技术能够在短期内大量提供南美叉柱花的种苗, 同时通过室内培养避免其受光周期诱导开花[14,15]。本研究通过对影响叉柱花组织培养及快速繁殖的因素进行了相关探索, 以期为叉柱花的工厂化组培育苗提供技术方案, 保障周年供应市场。

1 材料与方法

1.1 材料

2014年春季在南宁花鸟市场购买生长健壮的叉柱花成苗, 培养在亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室玻璃温室。

1.2 培养基与培养条件

改良MS培养基 (MX) :改良MS培养基的配方为:用Ca (NO3) 2·4H2O代替原MS培养基中的CaC l2·2H2O并添加抗坏血酸, 其他组分均无变化;其中Ca (NO3) 2·4H2O的浓度为95mg/L, 抗坏血酸的浓度为5mg/L;丛芽增殖培养基:在MX培养基中添加适量的6-BA、KT、NAA;生根培养基:在MX培养基中添加适量的I-BA及NAA。所有培养基附加蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L, p H值调至5.8±0.2, 经121℃高压灭菌20min。培养条件:温度25±3℃, 湿度为65%~80%, 光照度800Lx, 光照时间10h/d。

1.3 外植体消毒处理

选取叉柱花幼嫩的枝条作为外植体, 去除叶片, 用自来水冲洗30min, 然后用吸水纸吸干枝条表面水分。在超净工作台上, 将洗净的枝条切成带有1~2个芽的茎段, 先用70%酒精清洗30s, 再用无菌水冲洗3次, 每次3min, 立即转入含有吐温的0.1%的升汞溶液中分别浸泡7、9、11、13min, 晃动烧杯, 让材料充分接触消毒剂, 最后将材料用无菌水洗涤3次, 每次5min, 得到消毒外植体备用。

消毒好的茎段切除与消毒剂有接触的两端, 接种于诱导培养基MX+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L中, 每个消毒处理30个芽。于15d后统计污染率和萌芽率。

1.4 丛芽的增殖

取诱导得到的初代材料, 接种于丛芽增殖培养基, 培养基中激素的组合和浓度如表1所示, 进行继代培养21d, 比较不同浓度的6-BA和KT对叉柱花丛芽增值的效果, 统计20个芽的增殖情况。

1.5 叉柱花生根诱导

将叉柱花丛芽切成带有1~2不定芽的茎段, 然后将生物学底端插入生根培养基中。培养基以MX为基础, 添加不同浓度的NAA和IBA, 浓度见表2。进行生根培养15~20d, 统计20株再生植株根的数量和长度。

1.6 叉柱花的种植

当叉柱花幼苗生的根长至1~2cm、苗高3cm以上后, 将培养瓶瓶盖打开, 室内炼苗培养7d, 然后洗净根部培养基, 浸泡0.1%多菌灵溶液10min, 将组培苗根部用适量消毒后的岩棉包裹, 固定在直径5cm, 高6cm的塑料镂空杯中, 种植在遮光率为50%的塑料大棚的水池中, 保持叶面湿度。

2 结果与分析

2.1 外植体消毒

经过消毒处理后的外植体在诱导培养基上, 7~10d腋芽开始萌动, 在21d已经有丛芽 (图1) 。按1.3方法对叉柱花外植体进行消毒, 70%的酒精处理20s后, 再以0.1%HgC l2作4种不同时间的处理, 对其污染率、萌芽率和死亡率进行统计, 结果如表3。本研究中, 叉柱花外植体污染主要为细菌污染, 没有出现真菌污染, 可能是采用酒精和氯化汞相结合的2次消毒的结果[14]。外植体的污染率与0.1%HgC l2处理时间的长短负相关, 随着处理时间的延长, 0.1%H gC l2外植体的伤害增加, 污染率逐渐下降, 消毒13min的污染率比消毒7min的降低了60%, 并且出现细菌污染的时间也要滞后, 而外植体的萌芽率也逐渐降低, 在消毒13min时, 萌芽率仅为10%, 比处理7min的要低53.33%;外植体的死亡率不断上升, 处理4的死亡率最高, 高达66.67%, 而处理1仅为10%。在本研究中处理1~4均能得少量的无菌外植体, 通过结合萌芽率和污染率等综合因素分析, 采用70%酒精20s和0.1%HgC l2处理9~10min较为合适开展叉柱花外植体的消毒。

2.2 叉柱花丛芽的诱导与增殖

丛生芽通过不断继代增殖培养, 在短期内可以得到大量的无菌苗 (图2) 。从表4可以看出, 6-BA浓度在1~3mg/L内均能诱导不定芽的增殖, 增殖效率和浓度正相关。随着浓度的升高, 不定芽的增殖效率递增, 在6-BA浓度3mg/L时增殖系数达到7左右。但是仅用6-BA诱导芽过于密集, 节间短, 苗较弱, 不便于进行第2次增殖操作。在培养基中加入0.5~1mg/L的KT均能促进苗的均匀, 缓解6-BA浓度过高导致丛生芽的矮小, 并且增殖系数为6~7, 和原来增殖系数相当, 但改善了苗的均匀性。从节约生产成本的角度考虑, KT的浓度建议为0.5mg/L。

2.3 生根培养

将带芽的茎段接入生根培养基, 培养20d, 统计苗生根率、根的长度和质量。结果0.5mg/L和1mg/L的NAA都能诱导叉柱花的生根, 单独使用NAA, 得到的根相对较细, 在移栽过程中容易断。其中, 在1mg/L处理下根的数量在5条左右, 要比0.5mg/L的处理多2~3条, 根直径上没有明显的差异。添加0.1mg/L的IBA能显著提高根直径, 得到较为粗壮的苗, 完全能够满足后期的移栽, 保证成活率 (图3) 。MX培养基+NAA1g/L+IBA 0.1mg/L是适合诱导叉柱花生根的培养基。

2.4 炼苗及移栽

生根诱导培养25d左右, 叉柱花幼苗的根一般达到长1cm, 株高3cm左右。在开盖炼苗期间, 生长变慢, 叶片变厚。在移栽5~7d后, 植株叶片转绿, 有新根长出, 成活率在95%以上 (图4) 。

3 讨论

篇4：红颜草莓的离体培养与快速繁殖

关键词：草莓；离体培养；不定芽；快速繁殖

中图分类号： S668.404+.3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）11-0066-03

收稿日期：2015-04-14

基金项目：2014年江苏省农业三新工程（编号：SXGC[2014]141）。

作者简介：李慧（1971—），女，江苏宿迁人，硕士，教授，主要从事园艺作物的组织培养研究。E-mail：lihui710623@163.com。红颜又称日本99、红颊，是日本静冈县用章姬与幸香杂交育成的早熟草莓栽培品种。叶片大、新茎分枝多，结果能力强，果实品质好，果粒个大，果形、果色、价格明显优于丰香草莓。是春节前后集采摘、鲜食为一体的休闲旅游消费农产品，深受广大果农和顾客的喜爱。但是，红颜草莓苗不抗白粉病，不易育苗，幼苗一旦染病，几天内将全军覆没。因此，试管苗的繁育将有很大的市场前景。

1材料与方法

1.1材料

试验于2014年12月至2015年4月进行。供试材料红颜草莓苗引自淮安怡园果蔬种植专业合作社（实生苗2014年9月栽植在江苏联合职业技术学院淮安生物工程分院花卉实训中心的无土栽培槽内）。

1.2试验方法

1.2.1表面灭菌试验于晴天的下午取供试红颜草莓刚抽出的匍匐茎的幼茎段（母株要健壮、无病），流水冲洗泥土、灰尘。在无菌条件下，先用75%乙醇浸泡20～30 s，无菌水冲洗3～4次，再转入0.1%氯化汞溶液+2滴吐温-80分别浸泡8、5、4、2 min，无菌水冲洗5～8次。在以上的过程中要不断摇动，以去除附在外植体表面的气泡。用消毒滤纸吸干水珠后，将茎尖接种于诱导培养基中，调整pH值至5.6～5.8。每个灭菌处理各接种50瓶，1个外植体/瓶，20 d后观察记录外植体的污染、死亡、无菌成活生长等情况。

1.2.2茎尖分化能力试验取“1.2.1”节试验最佳处理，在双目显微解剖镜下剥去苞片和幼叶，将茎尖接种于MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基中[1]。接种外植体1个/瓶，30 d后观察记录茎尖分化情况。

1.2.3芽诱导试验取“1.2.2”节试验中最佳的茎尖剥制处理分别接种于以0.5 mg/L 6-BA为基础的附加不同种类生长素（0.2 mg/L）配成的培养基、以0.2 mg/L NAA为基础的附加不同种类生长素及细胞分裂素（0.5 mg/L）配成的培养基中[2]，每个处理各接种30瓶，1个外植体/瓶，30 d后开始调查记录幼芽分化情况。

1.2.4继代培养与扩大繁殖将长至1～2 cm的丛生芽每4～6株切成1块，转入不同浓度配比的6-BA和NAA配成的继代培养基中。每种处理接种20瓶，4块/瓶，培养20 d后统计每瓶幼苗数量，并计算出增殖率。

1.2.5根诱导试验用1/2MS附加不同浓度（mg/L）IBA，有0.05、0.10、0.20、0.50 mg/L及不加IBA的5个处理，接入幼苗3周后观察记录根的生长情况。

培养基均加3%蔗糖，在1.0～1.1大气压下热压灭菌20 min。培养温度（25±2） ℃。每日光照12 h，光照度2 000 lx 。

2结果与分析

2.1不同消毒剂对红颜幼茎灭菌的效果

在草莓组织培养中常用灭菌剂的种类很多。我们曾用过次氯酸钠10%水溶液（含有效氯0.4%～0.5%），浸泡接种材料10～15 min；次氯酸钙（漂白粉），用其饱和上清液，浸泡接种材料15～30 min；过氧化氢10%～12%水溶液，浸泡10～20 min ；新洁尔灭5%～10%水溶液，浸泡10～15 min；氯化汞0.1%水溶液，浸泡8～10 min。其中，前4种灭菌剂对接种材料比较安全，不会使活组织中毒死亡，但因灭菌时间较长，常常使接种材料的外层氧化变褐，影响培养效果。氯化汞有很强的杀菌能力，但浸泡时间稍长会造成接种材料中毒。即使在氯化汞处理完后，用无菌水冲洗7～8次，仍然有少量残留在外植体上，导致外植体死亡。

用0.1%氯化汞溶液浸泡处理5 min，外植体染菌率为0，成活率为78%；4 min浸泡茎段，外植体总染菌率为18%，死亡7个；当茎段浸泡2 min后，外植体死亡数为3个，但总染菌率高达56%（表1）。

观察中发现4种处理外植体在接种1周内都有不同程度褐化现象并导致生长缓慢，10 d后成活的外植体褐化现象消失（图1、图2）。这可能是因为使用乙醇进行表面消毒时，乙醇毒害所致。

2.2不同大小的茎尖对形态发生能力的影响

剥制后的红颜茎尖接种在芽诱导培养基中，7 d后开始膨大，并在外植体表面产生愈伤组织，20 d后部分愈伤组织上可形成幼芽。从表2可以看出，小于或等于0.1 mm的茎尖，无形态发生能力；当茎尖达0.2 mm时，只有有限的生长；茎尖大小达0.35 mm，带有最后1对较大的叶原基，而没有顶端下组织时，茎尖的分化率最高；如果切取0.5 mm的茎尖，发现茎尖直接形成单株苗，形成愈伤组织的百分率显著下降。

2.4不同浓度6-BA和NAA对幼苗增殖的影响

增殖培养基的筛选中，附加6-BA 0.5 mg/L分化反应正常，虽然在相同的时间里新芽分化量相对较少，而长成正常幼苗的数量却明显较多。当6-BA浓度超过1.0 mg/L时，新芽分化量很大，也都能长出叶片，只是叶片簇生在一起成球状，不能长成正常幼苗（表5）。从表5可以看出，2号培养基对幼苗增殖的生长分化最为有利。

此外，转苗过程中去掉原生叶片有利于新苗分化，在扩大繁殖中剔除愈伤组织，有利于新苗增殖和生长。

2.5不同浓度IBA对试管苗生根的影响

从表6可以看出，以IBA 0.1 mg/L浓度处理的生根率最高，为100%，平均根条数为2.3条。不加IBA及IBA超过02 mg/L，多数苗都是先于苗基切口处产生愈伤组织，随后在愈伤组织上分化生根。当生根苗移出栽植后，苗基的愈伤组织很快干死，使苗与根间形成了1个隔离层，成活率大大降低。

3讨论

本试验以红颜草莓为供试材料，研究其茎尖经脱分化后多数为愈伤组织上生根 0.50愈伤组织上生根 注：不同处理参试苗为150个，培养3周后统计结果。

诱导不定芽发生的因子，旨在提高草莓不定芽发生率。在植物离体形态发生中，影响器官分化的因素很多，但以植物激素的调控为主[3-6]。不同植物种类，控制其不定芽发生的植物生长调节剂的种类、浓度以及它们之间的组合不同，本试验中为BA与NAA的不同浓度组合。从不定芽发生的动态观察中可知，不定芽发生高峰期集中在接种后20～40 d的时间段内，50 d以后再生的不定芽，其芽体弱小，生长速度慢。这可能是由于随着时间的延长，培养基营养消耗大；同时，外植体自身分泌物的积累限制了不定芽的分化及生长，也可能与愈伤组织内某些生理生化物质的积累有关。

参考文献：

[1]李慧. 草莓茎尖离体培养研究[J]. 贵州农业科学，2004（2）：10-12.

[2]李慧，吴松，孙其文，等. 颠茄的离体培养与快速繁殖研究[J]. 北方园艺，2007（12）：192-194.

[3]张宁宁，夏明霞，张琼，等. 卡特兰组织培养研究进展[J]. 江苏农业科学，2013，41（4）：42-44.

[4]李林轩，韦莹，黄浩，等. 红芽大戟组织培养条件的优化[J]. 江苏农业科学，2014，42（4）：60-62.

[5]谭文澄，戴策刚. 观赏植物组织培养技术[M]. 北京：中国林业出版社，1991.

篇5：莺歌凤梨的离体培养和快速繁殖

1 材料与方法

1.1 供试材料

莺歌凤梨品种“彩苞凤梨”成熟植株新长出的侧芽，取自广西亚热带作物研究所温控大棚。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体灭菌

取生长健壮的侧芽先用流水冲洗干净，然后用中性洗洁精水浸泡30 min，再置于水龙头下轻剥小芽上的叶片，保留3～4片幼叶，流水冲洗1～2 h，带入接种室，在无菌操作台上采用不同的消毒剂和不同的操作方法进行灭菌消毒[2,3]。接种前切除茎端基部与消毒液接触部分，以未添加任何植物调节剂的MS为基本培养基。

1.2.2 分化培养

将在初代培养基上无污染的外植体材料接种到增殖培养基上。增殖培养基以MS为基本成分，添加30 g/L一级蔗糖以及不同浓度的6-BA植物生长调节物质，琼脂粉7.5 g/L,pH=5.8。培养周期为1个月。

1.2.3 继代培养

将诱导出来的不定芽丛切成单芽和小芽团(2～4个小芽)接种于继代增殖培养基上，继代培养基以MS为基本培养基添加不同浓度的6-BA和NAA。60 d后统计增殖情况。

1.2.4 壮苗及生根培养

将经过多次继代培养的丛生芽中2～3 cm长小芽切下转移到不同激素和浓度配比的1/2 MS+0.2%活性炭的培养基中诱导生根。60 d后统计生根率，观察生根情况。

以上各阶段的组织培养均在室内进行，培养温度为(28±2)℃，光照强度约为1500 l x，光照时间为16 h/d。

2 结果与分析

2.1 不同灭菌方式对外植体的影响

从表1中可以看出，对于莺歌凤梨侧芽的表面消毒，在75%的酒精中消毒30 s后，简单用升汞、甲基托布津或是次氯酸钠等任何一种药物的灭菌效果都不理想，接种7 d后，污染率最高的是甲基托布津(73.3%)，其次是次氯酸钠(66.7%)，其中升汞的效果略好一些，污染率为46.6%。试验结果表明，将莺歌凤梨侧芽先用75%的酒精消毒30 s后，用次氯酸钠浸泡15 min，然后在无菌条件下剥去1～2层幼叶，再经过0.1%升汞消毒8 min，可使污染率降低至26.7%。

2.2 不定芽的诱导分化

将在初次培养基中表现未受污染的茎顶端外植体转接到含有NAA0.5 mg/L和添加不同浓度的6-BA的MS培养基中，30 d后莺歌凤梨茎顶端外植体的培养结果如表2。从表2中可以看出，在所使用的6-BA浓度范围内，莺歌凤梨茎顶端都有不同程度的萌发。当6-BA浓度为1 mg/L时，外植体的芽诱导率为55%，同时茎顶端多形成较粗的单芽，在芽的基部只诱导出1～2个侧芽，小芽生长快。随着6-BA浓度的升高，外植体的萌发率也有所上升，顶芽基部逐渐膨大形成密集的丛芽团，丛芽生长较快;当6-BA浓度为5 mg/L时，芽诱导率为85%，外植体的萌发率并没有进一步提高，芽的生长也受到抑制，形成的簇芽团致密，同时小芽生长极为缓慢。

2.3 芽的继代培养

将诱导出来的丛芽团切割成小块芽团和单芽2种方式，继代于增殖培养基上，结果见表3。试验结果表明：在不添加任何激素的培养基中，单芽并没有新的小芽形成，丛芽的增殖倍数为0.1也只是丛芽块原来所带的短小的芽伸长形成。而添加有激素的培养基均能使单芽或丛芽诱导出多少不等的小芽。在相同的培养基上，丛芽诱导增殖倍数要高于单芽的诱导，在6-BA为1.0 mg/L和6-BA为2.0mg/L 2种培养基中培养，芽丛的分化随6-BA浓度的增加而增加，丛芽诱导增殖的倍数分别为3.0和4.5，而单芽的增殖倍数分别为0.5和1.5，丛芽增殖的倍数为单芽的3～6倍。另外，从苗的生长情况看，6-BA不仅影响芽的增殖，同时对芽的伸长生长也有较大影响。单芽或丛芽在含有较高浓度的6-BA培养基中，芽的长度分别为3.5 cm和2.5 cm，而在无激素培养基中芽的均长为2 cm。虽然单芽的长势较好，平均长度达3 cm，但增殖率较低，部分单芽并未能诱导出侧芽，而丛生芽在适合的培养基中不仅小芽的平均长度好而且增殖率高。由此可以看出，在莺歌凤梨芽的增殖过程中以丛芽为接种方式明显高于以单芽为接种方式。

2.4 壮苗及生根培养

将长度达3 cm以上的单芽分别接种于1/2MS+NAA1.0+IBA0.5和1/2MS+NAA1.0+6-BA0.52种培养基中进行培养，2个月后观察其生根情况，试验结果见表4。从表4看出，在添加NAA与IBA 2种激素的培养基中，莺歌凤梨的生根率有83.3%，大多数单芽均只长出一条根且根较细、短。而在添加NAA、IBA与6-BA 3种激素的培养基中，莺歌凤梨的生根率达100%，每株单芽均能分化出2～3条较粗长的根。由此可以看出，低浓度的6-BA在诱导莺歌凤梨根的分化与生长的过程中具有促进作用。

3 小结

植物组织培养中，要获得无菌外植体，所使用的消毒剂及消毒方式既要求能做到把外植体上所带的一切微生物，包括真菌、细菌及其他微生物都杀死的同时又不能损伤组织材料[4]。另外，消毒剂还应容易被无菌水冲洗掉，没有残毒存留或能自行分解、挥发，不影响消毒后外植体的生长和分化。观赏凤梨根部均不发达，基部叶片紧密排列呈莲状叶筒，其中经常灌以清水或施少量肥料。因此，以凤梨茎尖作为外植体时，其带菌量多，较难进行彻底的消毒。在我们的实验过程中发现，单一的消毒剂很难对外植体进行彻底的消毒，不仅污染率极高，而且由于所采的侧芽较幼嫩，很容易将外植体杀死。而采用多个消毒剂进行交叉消毒，可以将外植体的污染率降到最低。莺歌凤梨侧芽先用75%的酒精消毒30 s，再用1%次氯酸钠浸泡15 min，最后用0.1%升汞浸泡10 min可以将污染率从73.3%降到26.7%。

植物不定芽的分化能力与培养基中激素种类和浓度配比有着密切的关系。在我们的实验过程中发现，6-BA对莺歌凤梨不定芽的分化有着重要的作用。同时在莺歌凤梨快速繁殖过程中不同的接种方式对芽的增殖也有不同的影响。以丛芽为接种方式芽的增殖倍数明显高于以单芽为接种方式。可能是因为丛芽诱导时顶端优势弱，产生的IAA较少，从而使细胞分裂素和生长素的浓度及浓度比例处于有利于芽分化的最佳组合。另外，6-BA在莺歌凤梨生根培养过程中具有一定的促进作用，其作用机理还有待进一步研究。

参考文献

[1]郜爱民,徐晨光,张瑞明,等.凤梨科花卉的组织培养和快繁技术研究[J].安徽农学通报,2005,11(6):100-104.

[2]张金锋,徐美玲,葛胜娟,等.大榕树组织培养不同灭菌方法的初步研究[J].浙江农业科学,2010(3):501-502.

[3]魏晓兰.浅析三倍体毛白杨组织培养中外植体的灭菌[J].甘肃林业科技,2003,28(2):54-55.