蓝尾石龙子消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究

2024-04-20

蓝尾石龙子消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究(通用4篇)

篇1:蓝尾石龙子消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究

蓝尾石龙子消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究

目的 阐明蓝尾石龙子消化道内分泌细胞的.形态学特征、类型、局部分布和细胞密度.方法 应用免疫组织化学技术链霉卵白素-过氧化物酶(S-P)法.结果 蓝尾石龙子消化道中的内分泌细胞形态多样,呈圆形、椭圆形、纺锤形、梭形、锥形、烧瓶形和杆状.蓝尾石龙子消化道中显示出3种内分泌细胞,即5-羟色胺阳性细胞、生长抑素阳性细胞和胃泌素阳性细胞,未见高血糖素阳性细胞、P物质阳性细胞、胰岛素阳性细胞和胰多肽阳性细胞.5-羟色胺阳性细胞是消化道中最主要的内分泌细胞类型,其在消化道各段均有分布,但在各段分布密度不同.生长抑素阳性细胞仅分布于胃部.胃泌素阳性细胞局限分布于幽门和十二指肠部位.在蓝尾石龙子消化道内具有最多种类型内分泌细胞分布的部位是幽门,同时消化道内各种内分泌细胞在此部位也显示出最高的分布密度.结论 蓝尾石龙子与其他爬行动物消化道内分泌细胞在分布上存在一定的共同特征并具其独特性,这些共同特征可能反映着不同脊椎动物消化生理的相同点.

作 者:黄徐根 吴孝兵 HUANG Xu-gen WU Xiao-bing 作者单位:安徽师范大学生命科学学院,重要生物资源保护与利用安徽省重点实验室,芜湖,241000刊 名:解剖学报 ISTIC PKU英文刊名:ACTA ANATOMICA SINICA年,卷(期):37(5)分类号:Q954关键词:消化道 内分泌细胞 免疫组织化学 蓝尾石龙子 Digestive tract Endocrine cells Immunohistochemistry Eumeces elegans

篇2:蓝尾石龙子消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究

麻雀( Passer montanus) 属于鸟纲( Aves) 雀形目( Passeriformes) 文鸟科( Motacidae) 麻雀属 ( Passer)动物,对于麻雀消化道5 - HT免疫活性内分泌细胞和Gas免疫活性内分泌细胞的分布及形态学研究还未见报道。笔者拟采用免疫组织化学ABC法对麻雀消化道内5 - HT免疫活性内分泌细胞和Gas免疫活性内分泌细胞形态与分布进行观察,为探求内分泌细胞在鸟类消化道中的分布规律积累资料,同时为消化生理学的研究提供形态学基础。

1材料

1. 1试验动物

麻雀8只( 雌雄各半) ,购于哈尔滨市道外区花鸟鱼市场。

1. 2主要试剂

5 - HT抗血清、Gas抗血清、VEC - TASTAINABC免疫组织化学试剂盒,均由北京中山生物技术有限公司生产。

2方法

参照李淑兰等[6]的方法对麻雀 ( Passer montanus) 消化道内的5 - 羟色胺( 5 - HT) 免疫活性内分泌细胞和胃泌素( Gas) 免疫活性内分泌细胞进行免疫组织化学的定位和形态学研究。

3结果与分析

5 - HT免疫活性内分泌及Gas免疫活性内分泌细胞呈黑褐色或深棕色,背景为淡蓝色,反差强,容易辨认,对照试验呈阴性反应。

3. 1 2种免疫活性内分泌细胞的分布密度

5 - HT免疫活性内分泌细胞在麻雀消化道中除了食管和嗉囊外均有分布,分布密度高峰在空肠,腺胃分布密度最低; Gas免疫活性内分泌细胞只分布于肠中,而且空肠中分布密度最高,见表1。

3. 2 2种免疫活性内分泌细胞的分布位置及形态

麻雀消化道内5 - HT免疫活性内分泌细胞和Gas免疫活性内分泌细胞分布位置及形态相似,主要分布在腺泡上皮之间,形态以锥体形为主,见表2。

4讨论

5 - HT在消化道中是一种重要的生物活性胺,对消化有很强的调节功能,具有刺激黏液分泌、血管扩张和平滑肌收缩的作用[2,3]。已有研究表明,不同动物消化道5 - HT免疫活性内分泌阳性细胞的分布密度不尽相同。大多数动物5 - HT免疫活性内分泌细胞在胃幽门部分布密度最高,如胎生蜥蜴( Lacerta vivipara Jacquin)[4]、黑眶蟾蜍( Bufo melanostictus) 和黑斑蛙( Rana nigromaculata)[5]; 在十二指肠分布密度也较高,如中国林蛙 ( R. chensinensis)[6]、七彩山鸡( Phasianus colchicas)[13]; 也有少数例外,如红腹锦鸡( Chrysolophus pictus)[14]在空肠分布最多,三道眉草鹀( Emberiza cioibes Brandt)[12]多分布于盲肠和直肠。研究表明,麻雀5 - HT免疫活性内分泌细胞在其腺胃及以下的消化管中均有分布,其中在空肠分布密度最高,这与红腹锦鸡[14]的研究结果相同。

注: 同列数据数据肩标含相同小写字母表示差异不显著( P >0. 05) ,小写字母完全不同表示差异显著( P < 0. 05) 。

消化道的内分泌细胞除以内分泌或旁分泌的方式作用于靶细胞外,还存在直接向消化道腔内释放激素的外分泌方式[16]。生理学试验证明,动物胃肠壁分泌的5 - HT免疫活性内分泌细胞可直接释放入血或肠腔[3],电镜亦观察到5 - HT免疫活性内分泌细胞分泌物是通过弥散方式进入固有膜层的[9],如李淑兰等[4]报道的胎生蜥蜴消化道内可见有圆形或椭圆形的5 - HT免疫活性内分泌细胞位于固有膜内,证实可能由此类细胞所分泌的5 - HT直接进入血液循环完成内分泌。黄威权等[10]报道,大鼠 ( Rattusnorregicus) 胃肠道内的5 - HT免疫活性内分泌细胞可通过细胞突起深入到固有层或肠腔面,行使内分泌或外分泌功能,本次试验观察到麻雀消化道5 - HT免疫活性内分泌细胞形态大多数为锥体形,其突起指向腺泡腔,此种细胞可能行使外分泌功能,还有的为圆形,与内分泌功能相关,进一步证实了消化道内分泌细胞的内分泌、外分泌功能。

Gas是一种胃肠道激素,其功能是促进胃酸、胃蛋白酶原的分泌,对平滑肌有收缩作用,对正常胃黏膜细胞的生长和分化起重要的调节作用[17]。Gas免疫活性内分泌细胞普遍存在于不同动物组织中,但其分布密度不尽相同,大多数动物Gas免疫活性内分泌细胞集中在胃幽门部,如狼( Canis lupus)[11]、宽吻凯门鳄( Caiman latirostris)[7]等,还有一些动物集中在十二指肠,如鸡( Gallus domestiaus)[15]。本次试验与前人的研究结果存在分歧,麻雀的Gas免疫活性内分泌细胞只分布于肠中,而且空肠中分布密度最高,说明麻雀的消化主要在肠中进行,特别是在空肠。Gas除了能释放到血液循环中外,还可以沿着细胞间隙释放到胃肠腔内[3],在麻雀的腺胃中未见Gas免疫活性内分泌细胞,说明麻雀消化道中Gas可能通过血液循环对胃部起作用。

Gas免疫活性内分泌细胞大多分布在麻雀肠部腺泡上皮之间,在固有膜和肠上皮偶见。形态以锥体形为主,可能行使外分泌功能,少数为圆形或椭圆形,以内分泌作用于靶细胞,在其空肠部发现2个紧挨的椭圆形细胞,推测与旁分泌作用方式相关。

至于麻雀这2种内分泌细胞的分布型与其他动物不同的原因以及其是否还有其他种类内分泌细胞还有待于进一步研究。

摘要:为了对麻雀(Passer montanus)消化道内的5-羟色胺(5-HT)免疫活性内分泌细胞和胃泌素(Gas)免疫活性内分泌细胞进行免疫组织化学的定位和形态学研究,试验采用免疫组织化学ABC(avidin-biotin-peroxidase complex,ABC)法。结果表明:5-HT免疫活性内分泌细胞在麻雀消化道中除了食管和嗉囊外均有分布,分布密度高峰在空肠,腺胃分布密度最低;Gas免疫活性内分泌细胞只分布在肠部,且空肠是其分布密度的高峰。2种内分泌细胞的形态相似,以锥体形为主,其次是圆形,偶见梭形,主要分布于腺泡上皮细胞之间。根据内分泌细胞形态认为其具有内分泌和外分泌功能。

篇3:蓝尾石龙子消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究

【关键词】 颞下颌关节;软骨基质;免疫组织化学技术;印度豪猪蛋白;小鼠

Experimental Study on the Temporomandibular Joint Cartilage Matrix and the Expression of Ihh in Newborn Rats by Immunohistochemical Technique

SHAO Xiang,CHEN Hou-huang,CHEN Da,MA Yu-huan,ZHENG Wen-wei,YE Hong-zhi,LI Xi-hai

【ABSTRACT】Objective:To investigate the molecular mechanism of the development of temporomandibular

joint.Methods:Heads of five BAL B/C newlyborn rats were taken,fixed,decalcified,dehydrated and embedded.Immunohistochemical technique was used to detect the expressions of CollagenⅡ(ColⅡ),CollagenⅠ

(ColⅠ),Aggrecan and Ihh.Results:In the temporomandibular joint disk,the expressions of ColⅠ and ColⅡ

were positive,the expression of Ihh was strongly positive and Aggrecan had no obvious expression;while in condylar cartilage,the expression of ColⅡ was positive,the expression of Aggrecan was strongly positive,and Ihh and ColⅠ had a little expression.Conclusion:ColⅡ,ColⅠ,Aggrecan and Ihh have normal expressions,playing an important role in the formation and development of the temporomandibular joint.

【Keywords】 temporomandibular joint;cartilage matrix;Immunohistochemical technique;Ihh;mouse

颞下颌关节(temporomandibular joint,TMJ)由下颌骨的下颌头关节面、颞骨的下颌窝和关节结节关节面、关节囊、关节腔,以及将关节腔分为上、下两部分的关节盘组成[1],多种因素参与影响颞下颌关节的生长发育[2-3],了解颞下颌关节的生长发育过程,对深入研究颌面部畸形的发病机制有着重要的临床意义。小鼠的颞下颌关节基本结构与人相似,但下颌骨升支端有髁状突、喙突与角突,其中只有髁状突参与构成颞下颌关节。目前,颞下颌关节的结构和功能已有系统的描述,但其发育相关的分子生物学机制有待深入研究[4-5]。因此,本研究以新生乳鼠颞下颌关节为研究对象,采用免疫组织化学技术,观察小鼠发育过程中颞下颌关节软骨基质与印度豪猪蛋白(Ihh)的表达变化,为揭示颞下颌关节发育机制提供新的

途径。

1 材料与方法

1.1 实验动物 BAL B/C新生乳鼠5只,上海斯莱克实验动物有限责任公司购买雌性孕鼠生产,动物合格证号:SCXK(沪)字第2012-0002号。实验室室温恒定(22±1)℃,湿度(56±5)%,紫外线定期消毒,自由摄食饮水,给予质量分数为0.3%的钠饮食。

1.2 试剂和仪器 磷酸盐缓冲液(PBS,pH = 7.4,美国Hyclone公司);Ihh(1∶200;ab39634)、ColⅡ(1∶200;ab53047)、ColⅠ(1∶500;ab34710)和蛋白聚糖(Aggrecan)(1∶500;ab36861)抗体(美国Abcam公司);枸橼酸盐缓冲液(pH = 6.0,美国Sigma公司);山羊血清,通用型二步法检测试剂盒(含质量分数为3%的过氧化氢去离子水和多聚辣根酶标记羊抗兔IgG即二抗)以及DAB显色试剂盒(美国Thermo Fisher Scientific公司);光学显微镜(德国徕卡公司);石蜡切片机(德国徕卡公司);生物组织石蜡包埋机(孝感亚光医用电子技术有限公司)。

1.3 取 材 空气栓塞法处死新生乳鼠,立即放入PBS中,取下头部置于质量分数为4%的多聚甲醛4 ℃ 固定24 h,Kristense液脱钙1周,常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片备用。

1.4 免疫组织化学技术染色 室温下石蜡组织切片,二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱水,将切片放入

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10 mol·L-1枸橼酸盐缓冲液(pH = 6.0)的电炉锅内,锅内的水沸腾开始计时20 min,进行抗原修复,然后自然冷却到室温。山羊血清(1∶10)封闭非特异性染色,室温孵育15 min;然后分别加入一抗ColⅠ(1∶500)、ColⅡ(1∶200)、Aggrecan(1∶500)和Ihh(1∶200),PBS替代一抗作为阴性对照,4 ℃过夜;PBS洗涤后加入二抗(羊抗兔,1∶1000),37 ℃孵育20 min,再按试剂盒的说明书,ABC复合物处理,DAB显色,封片。光学显微镜下观察颞下颌关节免疫组化染色的

形态。

1.5 阳性细胞判断标准 颞下颌关节出现棕黄色颗粒为阳性细胞,观察蛋白的分布、阳性强度和阳性率。按染色强度打分:-为无色,+为浅黄色,++为棕黄色,+++为棕褐色,染色强度需与背景色相对比。

2 结 果

免疫组化染色结果定位明确,背景清晰,阳性颗粒清楚。ColⅡ在关节盘与髁状突软骨中均表达强阳性,Aggrecan特异性表达于髁状突软骨中,ColⅠ在关节盘中表达阳性但是髁状突软骨中仅见少量表达,Ihh在关节盘中表达强阳性、髁状突软骨表达明显较少。ColⅡ与Aggrecan的表达位置强弱基本一致,ColⅠ与Ihh的表达位置基本一致。见图1-图5。

3 讨 论

软骨基质主要由胶原纤维和蛋白多糖构成,具有缓解关节应力,维持关节周围组织拉伸性能的作用。ColⅠ和ColⅡ是颞下颌关节中最主要的胶原蛋白,它们通过聚集分子形成关节盘、髁状突以及关节窝。Aggrecan是最主要的蛋白多糖,以聚合体的形式存在,被包绕在胶原纤维间基质内,维持胶质网状结构充盈且具有高度弹性,也是软骨形成和骨骼发育的基本物质。蛋白聚糖与透明质酸结合形成复合物,游离于关节液中,形成高度的粘弹性,对关节软骨起着减震和润滑等机械保护作用[6]。

在正常的生长发育过程中,髁状突的生长方式属于软骨内成骨,软骨内成骨始于增殖层内未分化的间充质细胞的增殖和分化,促进前体软骨细胞分化为软骨细胞,再逐渐成熟分化为前肥大软骨细胞和肥大软骨细胞,软骨基质由Ⅱ型胶原转变为X型

胶原,之后新生血管长入,肥大软骨细胞发生程序性死亡,部分矿化的软骨逐渐被骨替代。

Ihh是豪猪蛋白家族的一员,在颞下颌关节髁状突的发育过程中发挥重要作用,与髁状突生长、软骨的表型、软骨祖细胞的功能有关,同时是关节盘和关节腔形成的必要条件。胚胎发育早期,Ihh在颞下颌关节髁状突内已经有较强表达,Ihh受体及其效应基因Gli 1、Gli 2和Gli 3的表达范围已达髁状突外层的多形软骨细胞层和关节盘原基。在新生小鼠颞下颌关节的软骨和软骨膜中,Ihh基因显著表达[7],这与本实验的研究结果一致。Ihh基因敲除小鼠的髁突组织不能正常生长,结构紊乱,表现为细胞的增殖速率显著降低,具有增殖和分化功能的间充质细胞数量减少,软骨细胞的数量不足以维持髁突软骨的正常生长。同时,新生小鼠髁状突软骨内Ihh缺乏的同时伴随着ColⅠ、ColⅡ和Aggrecan表达改变,最终导致髁状突表面纤维软骨的特性改变[8]。

实验表明,ColⅡ和Aggrecan同时在髁状突软骨中高表达,ColⅠ主要在关节盘中表达,关节盘主要成分为纤维软骨,ColⅠ为纤维软骨所独有,可能是因为在颞下颌关节形成和发育过程中,ColⅠ

具有维持骨结构的完整及骨生物力学特性,而ColⅡ和Aggrecan则通过构成软骨基质,促进软骨细胞的分化,从而促进软骨的形成及骨骼发育。Ihh在新生乳鼠颞下颌关节的关节盘和髁状突中均有表达,可能因其在维持关节盘骨生物学特性、促进髁状突软骨发育中均发挥重要作用。本实验运用免疫组化染色法检测了乳鼠发育期颞下颌关节各部位Ihh、ColⅡ、ColⅠ和Aggrecan的表达变化,指标定位准确直观,且操作简便,实验费用低,具有同类实验其他方法所不具备的优势。

目前,影响颞下颌关节发育的因素尚未完全探明,如调控颞下颌关节组织间相互关系的信号分子的类型、关节盘形成过程对关节窝的影响等。未来的研究中,可以尝试运用实验胚胎学或者使用基因敲除小鼠模型进行研究,进一步阐明颞下颌关节发育的细胞和分子学机制。

4 参考文献

[1]Wang Y,Liu C,Rohr J,et al.Tissue interaction is required for glenoid fossa development during temporomandibular joint formation[J].Dev Dyn,2011,240(11):2466-2473.

[2]Li X,Liu H,Gu S,et al.Replacing Shox2 with human SHOX leads to congenital disc degeneration of the

temporomandibular joint in mice[J].Cell Tissue Res,2014,355(2):345-354.

[3]Li X,Liang W,Ye H,et al.Overexpression of Indian hedgehog partially rescues short stature homeobox 2-overexpression-associated congenital dysplasia of the temporomandibular joint in mice[J].Mol Med Rep,2015,12(3):4157-4164.

[4]Gu S,Wu W,Liu C,et al.BMPRIA mediated signaling is essential for temporomandibular joint development in mice[J].PLoS One,2014,9(8):e101000.

[5]Wu Y,Gong Z,Li J,et al.The pilot study of fibrin with temporomandibular joint derived synovial stem cells in repairing TMJ disc perforation[J].Biomed Res Int, 2014:454021.

[6]Aspberg A.The different roles of aggrecan interaction domains[J].J Histochem Cytochem,2012,60(12):987-996.

[7]Hinton RJ,Serrano M,So S.Differential gene expression in the perichondrium and cartilage of the neonatal mouse temporomandibular joint [J].Orthod Craniofac Res,2009,12(3):168-177.

[8]Li X,Liang W,Ye H,et al.Overexpression of Shox2 leads to congenital dysplasia of the temporomandibular joint in mice[J].Int J Mol Sci,2014,15(8):13135-13150.

收稿日期:2016-04-20;修回日期:2016-07-22

篇4:蓝尾石龙子消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究

关键词:东北雨蛙,消化道,5-羟色胺 (5-HT) 细胞,免疫组织化学

研究表明, 5-羟色胺 (5-HT) 是机体内重要的神经递质和调节物, 能刺激胃肠黏液分泌、平滑肌收缩和血管扩张, 对消化功能具有很强的调节作用。东北雨蛙隶属于两栖纲无尾目雨蛙科雨蛙属, 在中国主要分布于黑龙江、辽宁、吉林、内蒙古等地。国内关于雨蛙科动物的报道主要集中在染色体及胚胎学方面, 例如秦岭雨蛙染色体核型的研究, 无斑雨蛙染色体C带的分析, 无斑雨蛙早期胚胎发育的观察研究[1]及中国雨蛙的染色体及精子结构与发育方面的研究等[2,3];而对于雨蛙科动物的消化道内分泌细胞方面的研究未见报道。试验通过对东北雨蛙消化道5-HT细胞的研究丰富了消化道内分泌学的资料, 同时也为无尾两栖类的消化生理学研究提供形态学基础。

1 材料

1.1 试验动物

东北雨蛙10只, 采自黑龙江省帽儿山。

1.2 试验试剂

5-HT抗血清 (兔抗人) 、VECTASTAIN ABC免疫组织化学试剂盒, 购自北京中山生物技术有限公司。

2 方法

2.1 染色

应用免疫组织化学ABC染色法[4]对东北雨蛙消化道内5-HT细胞进行染色。

2.2 观察与计数

在显微镜 (型号为BH-2) 下观察, 在每个部位随机选取10个切片, 400倍视野 (物镜40×, 目镜10×) 计数, 利用SPSS 18.0软件并采用Duncan’s多重比较进行统计学分析, 应用显微镜 (型号为LEICA DC500 DM LB2) 成像系统拍照。

3 结果与分析

3.1 5-HT细胞的分布与形态特征

5-HT细胞在消化道内分布广泛, 除回肠以外均有分布, 具体形态与分布位置见表1。

3.2 5-HT细胞分布密度

东北雨蛙消化道5-HT细胞的分布密度以贲门和十二指肠最高, 空肠分布密度最低, 见表2。

4 讨论

4.1 5-HT细胞的分布范围

研究表明, 5-HT细胞广泛分布于各纲动物中, 但分布范围有所差异。在哺乳动物中, 狼和家犬消化道内5-HT细胞在贲门至直肠均有分布[5], 中国穿山甲消化道5-HT细胞分布于幽门部及整个肠道[6], 鸟类消化道5-HT细胞主要分布于十二指肠及以下部位, 如白鹮[7]、七彩山鸡[8]。鱼类动物中, 消化道5-HT细胞的分布范围差异较大, 如褐蓝子鱼[9]的消化道5-HT细胞可见于消化道全长, 而花鲈[10]则只见于食管、胃贲门部、胃体部、胃幽门部, 肠道各段均未检测出。两栖爬行动物消化道5-HT细胞分布范围基本相同, 均可见于消化道全长, 如红耳龟[11]、山地麻蜥[12]及东方铃蟾[13]等。试验中, 东北雨蛙消化道5-HT细胞仅分布于除回肠以外的消化道, 这与以上各纲动物消化道5-HT细胞的分布范围均不相同, 这种差异的原因可能与其生活环境有关。

注:同列数据肩标字母完全不同表示差异显著 (P<0.05) , 含相同字母表示差异不显著 (P>0.05) 。

4.2 5-HT细胞的分布密度及特点

东北雨蛙消化道5-HT细胞在胃贲门及十二指肠分布密度最高, 这与多数两栖类动物分布密度高峰为幽门部不同, 如牛蛙[14]、黑龙江林蛙[15]、叶氏肛刺蛙[16], 但与东方铃蟾[13]、日本林蛙[17]的分布相似。李淑兰等[13]认为, 5-HT细胞在胃贲门部分布密度较高, 可能与调节食物通过时肌肉的收缩运动有关, 而5-HT细胞在十二指肠出现分布高峰则是由于十二指肠是消化和吸收的主要场所, 5-HT细胞分泌的5-HT能刺激平滑肌收缩和血管扩张, 有助于食物的消化和吸收。除胃贲门部及十二指肠外, 东北雨蛙的食管内5-HT细胞分布较高, 这与吴孝兵等[18]在扬子鳄中的研究结果相同, 扬子鳄具有吞食动物性食物的习性, 未经咀嚼的食物在经食道下行时需经5-HT及其他因子的调节, 而东北雨蛙亦有吞食食物的习性, 其食管内5-HT细胞分布较多可能与此有关。从东北雨蛙整个肠道5-HT细胞分布来看, 其空肠、直肠处分布密度最低, 这与红耳龟[11]、黑龙江林蛙[15]、白条草蜥[19]等分布相同, 而与5-HT细胞分布密度高峰为直肠和空肠的丽斑麻蜥[20]、非洲爪蟾[21]不同。说明与两栖类爬行动物相比, 东北雨蛙消化道5-HT细胞分布型的形成可能与其食性有关, 并具有一定的种属特异性。

4.3 5-HT细胞的位置形态与功能

现有的研究已经证明, 消化道内分泌细胞具有内分泌功能, 试验观察到东北雨蛙消化道内有大量的椭圆形5-HT细胞, 进一步证明了消化道5-HT细胞具有内分泌功能。在东北雨蛙消化道内还观察到长梭形和锥体形细胞, 其长突起伸入腺泡腔和肠腔, 这种形态的细胞与外分泌功能有关, 但是否具有旁分泌功能还有待于进一步研究。

5 结论

东北雨蛙消化道5-HT细胞除回肠外均有分布, 且分布密度最高峰位于胃贲门及十二指肠, 这与多数两栖类动物消化道5-HT细胞分布密度高峰为幽门部结果不同, 这种差异还有待于进一步研究。参考文献:

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