不依赖别人议论文

2024-04-25

不依赖别人议论文（通用6篇）

篇1：不依赖别人议论文

不依赖别人的说说

1、不依赖别人，只相信自己。

2、安全感别人给不了，所以我会努力瘦下来，不依赖不依附。

3、你如果想要人生的意义，别取书上写的，别人说的，那跟你没有关系。

4、终于懂得，人的成长，注定是一场孤独的旅途。我们都要学会一个人度过在生命里的每个寒冬，不奢求别人，不依赖别人，自己来温暖自己，自己来治愈自己，自己来给自己力量和勇气。我们都一样，要学会承受人生必然的孤独与无助，挺过去，才能看见美好和繁华。

5、习惯别人习惯不起。还是不依赖别人的狮子最酷啦。

6、当你遇到问题的时候，不要急于问人，应该尽下心来认真思考、琢磨，虽然很累，会走很多弯路去询求正确答案，但你学会了思考，不依赖别人而活，在你孤立无援的时候，你还有自己，因为你还是自己的主人。

7、我所理解的生活照顾好自己不依赖别人。

8、什么时候才能做到经济独立，不靠别人，不依赖父母，仅自己努力。

9、人一定要有独立的人格，不依赖于别人，否则，那个被依赖的人如果离开，那你得生活就会即刻崩塌！

10、不依赖，不寄托，不给别人找麻烦，不给自己找牵挂。

11、关心自己的点点滴滴，不依赖于别人！认真看书，不断的超越现在的自己！

12、我们总要学着自己长大，不依赖别人。

13、寂寞时希望成仙不依赖别人。

14、以前的我独立坚强不无理取闹不依赖别人，挣得不多但过得很好。后来到了该找对象的年纪别人都说你别太要强我试着做一个小女人现在的我多愁善感患得患失招人烦不讲理不成熟有脾气。其实有谁没谁都一样反正谁都指不上何必非要找对象。

15、慢慢的，不需要被嘉奖，没有太多胆怯，不害怕失去，不依赖别人，可以很好地全凭自己，可以一个人把自己的生活过精彩。

16、不依赖别人才是对自己最大的肯定，世界会因为你的努力而变得精彩。

17、不依赖别人，是现阶段要努力的点你也可以说这是我的.矫情。

18、真的没有人会细心到照顾你的情绪，所有坏的好的你都得自己接受。保持一颗清醒的头脑，不依赖别人。

19、愿你我内心都能强大，不依赖别人，独立又温暖。

20、女人最先衰老的往往不是容颜，而是那不顾一切地闯劲，不依赖别人，让自己永远对世界好奇，保持对生活的热爱，保持对未知的尝试，这是我对女人极致性感的定义。

21、不依赖别人只相信自己。

22、未来还是要靠自己，不依赖别人，不抱怨现状。

23、可以自己开车，不依赖别人，可以静静感受生活的美好，积极向上！

24、生活总会教人学会坚强，学会独立。不依赖别人，活出自己。

25、七夕自己过怎么了，这说明我不依赖别人。

26、慢慢的感觉到自己开始变老了。开始嗜睡，会在夜晚惊醒之后疯狂的想家，在夜晚脆弱的一塌糊涂，精神衰弱也越来越严重，感觉身体大不如从前。有些方面开始异常的像小孩，有些方面却成熟的害怕。开始思考人生的路该怎么走，更多的考虑自己和父母，也开始不依赖别人。觉得一个人也很好。

27、我害怕孤独我不喜欢讲话所以特别依赖别人被人抛弃了好像个傻子一样喝酒自残。

28、改变自己，提升自己，不依赖别人！！

29、我们终会懂得，人的成长，注定是一场孤独的旅途。我们都要学会，在生命里的那个寒冷的冬天，一个人孤独的过冬。不奢求别人，不依赖别人，自己温暖自己，自己之于自己，自己给自己力量和勇气。

30、你们要争独立，不要争自由。你们要争自由，自由是针对外面束缚而言的，独立是你们自己的事，给你们自由而不独立，仍是奴隶。独立要不盲从，不受欺骗，不依赖门户，不依赖别人，这就是独立的精神。

31、人生在世，必须拥有能够自身圆满的愿望。我的存在不依赖别人，也不因为别人。

32、人也要学会独立，自己陪自己。不依赖别人，才能保持清醒的头脑。

33、可以越来越是个小大人，独立，身处何方，何地都可以照顾好自己，不依赖任何人，可以去照顾别人。

34、从明天起，自己一个人承担所有事情，不依赖别人，自己解决问题，不埋怨不抱怨，加油，明天又是美好的一天，阴霾留给昨天，没什么大不了的，人生不会无路可走。

35、想要的自己买，自给自足，不依赖别人，这样你才会闪闪发亮......

36、人与人之间保持舒服的距离，从来不依赖谁，试着理解别人，站别人角度考虑，短暂不联系，也很正常。

37、自立自强：就是靠自己的劳动生活，不依赖别人，不安于现状，勤奋，进取，依靠自己的努力不断向上。

38、不执着对未来的控制感，不依赖别人的照顾，一切就不再是威胁，不再是心痛，也不再是惩罚

39、再也不会强求别人为自己做任何改变，不依赖任何人，过好自己的小日子就行。

篇2：不依赖别人议论文

2. 觉得自己做的到和做不到，其实只在一念之间。

3. 一个今天胜过两个明天。

4. “不可能”只存在于蠢人的字典里。

5. 目标不是都能达到的，但它可以作为瞄准点。

6. 我努力，我坚持，我一定能成功。

7. 大多数人想要改造这个世界，但却罕有人想改造自己。

8. 有勇气并不表示恐惧不存在，而是敢面对恐惧克服恐惧。

9. 用最少的悔恨面对过去;用最少的浪费面对现在;用最多的梦想面对未来。

10. 如果你想得到，你就会得到，你所需要付出的只是行动。

11. 光说不干，事事落空;又说又干，马到成功。

12. 对于每一个不利条件，都会存在与之相对应的有利条件。

13. 勤奋，是步入成功之门的通行证。

14. 失败的历程也是成功的历程。

15. 成功=艰苦劳动+正确方法+少说空话。

16. 世间成事，不求其绝对圆满，留一份不足，可得无限美好。

17. 记住：你是你生命的船长，走自己的路，何必在乎其它。

18. 你要做多大的事情，就该承受多大的压力。

19. 生活充满了选择，而生活的态度就是一切。

20. 死亡教会人一切，如同考试之后公布的结果――虽然恍然大悟，但为时晚矣!

21. 年轻是我们唯一拥有权利去编织梦想的时光。

22. 自信是成功的第一诀窍。

23. 不论成功还是失败，都是系于自己。 ——朗费罗

24. 一个不注意小事情的人，永远不会成功大事业。——戴尔·卡耐基

25. 不是每一次努力都有收获，但是，每一次收获都必须努力。

26. 心小了，所以小事就变大了;心变大了，所有的大事都变小了。

27. 靠山山会倒，靠水水会流，靠自己永远不倒。

28. 人所缺乏的不是才干而是志向，不是成功的能力而是勤劳的意志。

29. 成功的奥秘在于目标的坚定。——迪斯雷利

30. 瀑布对悬崖无可畏惧，所以唱出气势磅礴的生命之歌。

31. 成功，是内心的造就。——拉尔夫.M.福特

32. 努力是成功之母。——塞万提斯

33. 同在一个环境中生活，强者与弱者的分界就在于谁能改变它。

34. 如果在胜利前却步，往往只会拥抱失败;如果在困难时坚持，常常会获得新的成功。

35. 世界青睐有雄心壮志的人。成功所依靠的惟一条件就是思考。当你的思维以最高速度运转时，乐观欢快的情绪就会充斥全身。没有人能在消极的思维火光中做好一件事。一个人最完美的作品都是在充满愉快乐观深情的状态下完成的。

36. 这个世界上任何奇迹的产生都是经过千辛万苦的努力而得的，首先承认自己的平凡，然后用千百倍的努力来弥补平凡。

37. 人在身处逆境时，适应环境的能力实在惊人。人可以忍受不幸，也可以战胜不幸，因为人有着惊人的潜力，只要立志发挥它，就一定能渡过难关。

38. 活着一天，就是有福气，就该珍惜。当我哭泣我没有鞋子穿的时候，我发现有人却没有脚。

39. 感谢上苍我所拥有的，感谢上苍我所没有的。

篇3：不依赖连接反应的高通量克隆方法

1 不依赖于连接的克隆 (Ligation independentcloning, LIC)

从狭义来讲, 此法主要分为T4DNA聚合酶法和核酸外切酶Ⅲ法[3];从广义来讲, 不依赖连接克隆法不需要用到传统的连接程序, 这里主要介绍T4DNA聚合酶法。

LIC法[4]最初是由Aslanidis和De Jong于1990年提出, 这种方法主要依赖于T4DNA聚合酶的3′-5′外切酶活性。首先, 设计扩增目的基因引物时, 其5′端的12个碱基中不含dCMP, 而PCR扩增的线性载体末端的5′端12个碱基中不含dGMP;然后利用T4DNA聚合酶的3′-5′外切酶活性分别处理待插入的目的基因片段及线性化载体, 使其5′端分别产生粘性末端, 由于这两种分子的侧翼互补, 退火后转化大肠杆菌, 在大肠杆菌中可得以修复。需特别强调的是T4DNA聚合酶对线性载体或者目的基因片段的终止采用的是dNTP的竞争性终止[5] (图1) 。这种方法效率很高, 许多研究[6~9]者都使用这种方法来构建载体插入目的基因。Dieckman等[10]在2002年利用LIC方法设计了一套实验步骤, 可以在3天克隆400个基因。谈蓉等[11]也曾报道过一种不依赖连接的克隆载体, 该载体被内切酶N.BbvCIA和SwaI作用产生长的粘性末端, 目的基因PCR片段在4mmol·L-1 dGTP的作用下被T4DNA聚合酶处理生成互补粘性末端, 将经过dCTP处理的载体和上述经过dGTP处理的目的基因PCR片段共同转化至大肠杆菌体内, 通过修复再引入大肠杆菌表达系统;利用此表达系统表达蛋白的结果表明LIC法对于目的基因的高通量克隆和表达是高效的, 对天然蛋白的产生也同样高效。但对于载体而言, 如果没有预先改造好的载体, 即在载体的插入片段添加一段缺失单个脱氧核糖核酸的接头序列, 要想获得较长的粘性末端需要多次进行T4DNA聚合酶处理, 操作不是很方便。

在LIC的基础上, Li等[12]所建立的不依赖序列和连接的克隆方法 (SLIC) 能满足多基因片段的重组, 此方法不受DNA序列的限制, 可以将多个DNA片段组合到一起, 并且不需要连接反应即可完成体外的重组 (图2) , 其可靠性已被白帆等[13]证实。此方法只需在PCR引物上加入与载体同源的20~30bp DNA片段, 不需要酶切和连接反应, 很大程度上简化了DNA重组的过程。在这种情况下几乎没有DNA分子自连的情况, 也简化了重组子的筛选过程。虽然SLIC法有如此优点, 但在实际操作过程中, 需要的重组DNA片段接头处不能达到理想状况, 极易形成二级结构, 影响了DNA分子的互补复性, 从而降低了重组的效率。为了解决此问题, 王广珺等[14]将退火使用的连接酶缓冲液改换成了退火缓冲液, 并使用相应的退火程序, 重组效率提高了10倍左右;在此之外, 她们尝试将参加重组的若干DNA片段在同一反应体系中用T4DNA聚合酶处理 (最初发明的SLIC法中, 所有参与重组的DNA片段都是用T4DNA聚合酶分别进行处理的) , 再使用相同的方法退火, 所得结果显示重组效率仍可以提高10倍。这些方法的改进可大大减少研究人员的工作时间和工作量, 节约T4DNA聚合酶的用量和实验成本。

2 尿嘧啶DNA糖基化酶克隆法 (Uracil DNA-glycosylase, UDG)

尿嘧啶DNA糖基化酶 (UDG酶) 是参与TTP生物合成的一种酶, 水解尿嘧啶和脱氧核糖之间的N-糖苷键, 产生脱碱基的dU, 从而破坏DNA碱基的配对。

UDG法由Nisson等[15]提出, 与LIC法有类似之处, 最大的不同是基因片段的末端12bp核苷酸含dUMP。该法利用尿嘧啶DNA糖基化酶能选择性地降解DNA中dUMP的性质, 在引物5′端引入一个长为12个碱基的序列, 其中dU代替dT, 由此扩增出的PCR产物, 经UDG酶解而移去其中的脱氧尿嘧啶后, 该部分单链被水解产生3′延长的PCR产物。质粒载体线性化后, 加上与之前目的基因PCR产物序列互补的接头后, 载体和PCR产物就可以退火, 然后进行转化 (图3) 。此方法的优点是UDG在Taq DNA聚合酶的反应缓冲液中仍有活力, 不必更换离心管, 即尿嘧啶DNA糖基化酶消化PCR产物与载体的退火可同时在一个离心管中完成, 且能直接转化感受态细胞。这种方法操作简便又不存在载体背景[16];缺点是效率不高, 因为UDG催化尿嘧啶碱基的切除, 形成一个脱碱基 (脱嘧啶) 位点, 但同时保持了磷酸二酯键骨架的完整性, 可能会影响之后重组的效率。后来一些研究者克服了这些困难, 提高了产生粘性末端的效率, 他们在反应体系中加入一种核酸内切酶VIII (一种DNA糖基化酶-裂解酶) , 该酶的裂解酶活性则分别在脱碱基位点的3′端和5′端裂解形成的磷酸二酯键骨架, 释放无碱基的脱氧核糖, 这两种酶的混合物称为US-ER[17] (Uracil-Specific Excision Reagent) 酶, 通过此方法大大提高了产生单链突粘性末端的效率。

3 Gateway重组克隆

Gateway重组克隆技术由Walhout等[18]提出, 是一种通用性的克隆方法, 与传统克隆方法相比, Gateway技术 (图4) 的优点是可以不必考虑目的DNA是否有合适的酶切位点, 也不必进行繁琐而费时费力的酶切和连接反应, 就可以按确定的方向和读码框快速而准确地将目的基因克隆到各种与Gateway技术兼容的目的载体上[19,20]。它是根据λ噬菌体编码λ整合酶指导噬菌体DNA插入大肠杆菌染色体中, 通过两个DNA分子的特异位点进行重组, 因此所有被感染的细胞都发生了整合作用[21]。它利用λ噬菌体与大肠杆菌染色体之间发生的位点特异性的重组整合与切除反应, 即LR和BP。BP反应是利用一个attB DNA片段或表达克隆和一个attP供体载体之间的重组反应, 创建一个入门克隆。LR反应是一个attL入门克隆和一个attR目的载体之间的重组反应。LR反应用来在平行的反应中转移目的序列到一个或多个目的载体。重组位点attB、attP、attL和attR由噬菌体λ和大肠杆菌编码的酶合剂特异识别[22]。Invitrogen公司开发了包括运用于原核、酵母、昆虫和哺乳动物等不同宿主的表达载体, 大大提高了Gateway技术的适用性。Gateway技术已被广泛用于高通量载体的构建[23~25]。顾洪生等[26]利用Gateway技术成功构建了重组腺病毒载体pAd-LMP-1, 整个构建过程中不需要酶切和连接反应, 也不需要蓝白菌落筛选, 简单快捷。梅文倩等[27]利用Gateway克隆技术成功地大规模克隆了拟南芥转录因子, 将6个拟南芥转录因子的ORF克隆入植物表达载体pPTV和酵母表达载体pYTV中, 通过酵母融合表达实验和Western-blot检测证明了该克隆途径的可行性。该Gateway克隆技术的不足是通用性不如经典克隆方法强, 本身含有重组类似或保守序列的片段或结构复杂的片段应用此法可能会受影响。

4 小结

篇4：过分依赖别人易早衰

我的朋友老李和老赵两人同岁，身体状况也差不多。老李的儿女住得远，他的事情又不愿麻烦别人，如买米面、交水电费、到单位报销等，都是自己跑着办。由于经常活动，手脚很利索，大家都说他退休后这么多年没什么变化，一点也不显老。而老赵就不同了，他和儿子在一起居住，儿子很孝顺，为了让老爸享清福，老赵的一些大事小情全是儿子帮办。于是老赵一天天无所事事，不是看电视就是坐着喝茶，连他屋里的卫生也不需要他打扫，真是衣来伸手，饭来张口。结果他越歇越懒，越吃越馋，身体变得又胖又沉，更是不想活动，整天迷迷糊糊，无精打采。后来他得了冠心病和糖尿病，更是很少出门了，有一次他出门送朋友，别人见了都说他明显变老了。

在日常生活中，像老李和老赵的例子很多。充分说明，过分依赖别人，就是过早地把自己归入“无用”的行列，于是失去了生活的主观能动性和独立性，不愿意费心费力按自己的能力和意志去安排生活，从而加速了心理和身体的老化，人便显得很衰老。

俗话说“活动活动，只要活着就要动”，退休后不要成天歇着，什么事也不想干，不活动会导致大脑思考问题的能力迟钝，四肢肌肉萎缩退化，时间一長，还容易发生抑郁症和老年性痴呆，使身体过早衰老下去。所以退休后不要坐着躺着“享清福”，而且尽量少依靠别人，自己的事自己干，并要培养多种兴趣和爱好，加强身体锻炼，防止身心过早衰老。

篇5：依赖别人是在否定自己

在实际的经营和生活中，像这样的情况很普遍，我们经常能听到这样的声音：“我们国家太穷了”，“国人的素质太低了”，“我们公司的机制太差了”，“我的上级水平太洼了”，“我的父母没有能力，不能让我像人家的孩子那样含金匙而生”，“某某某限制了我的发展”，“我在部门没有发展的机会”……

他们的潜台词是：“如果我生在发达国家就好了”，“如果我的公司能像世界五百强的某个公司就好了”，“如果我的父母有能力就好了”，“如果我们家有关系就好了”，“如果我碰到某位伯乐某位贵人就好了”……他们信奉：创业没有资金不行，发展没有人际关系不行，成名没有人捧场不行，成才没有伯乐不行，成家没有可心的爱人不行，总之他们对于成功创业成家，什么都想到了，唯独没有想到的是自己的作用和价值。这类人总是希望别人已经给他们创造好了条件，让他们不费吹灰之力，业绩成果和好的生活就唾手可得，如果现实中没有给他们创造现成的好条件，就开始抱怨牢骚。

这是一种很严重的病，讲得好听一点叫“客观条件依赖症”，依赖别人，没有自我。难听一点就是“精神寄生虫病”，梦想靠别人的恩惠生活，外加一张牢骚的嘴巴。这种病的最基本的病根，是对自己没有信心，从思想上没有挖掘自己本身的潜力，没有发挥出自身的主观能动性。但是追求生活的美好愿望却是与常人无异，当自己的能力和现实情况与愿望相差太多时，一边是对现实自己落魄的自卑，一边是“精神自卫式（给自己找理由而抱怨外界客观环境下的不平）”的牢骚。

2月24日，我给营销人员上培训课，听到一位业务人员讲：销售主要靠广告来拉动。我当时就反问这位“广告依赖症患者”：销售的思路是仅仅依赖广告卖货吗？做的广告投入一个亿，收入几千万，这样的企业不是没有过，结果有多少这样的企业已经成为企业竞争的炮灰？做营销不做广告不行，但做什么样的“广告”最有效果？两军相遇勇者胜，做最有信心的广告，做自动自发的广告，做勇于自我推荐的广告！皇明诞生时负债近百万，广告费一分钱没有，当时本行业已有企业近百个，随便哪个都比我们大，有的企业已有过亿元的规模，皇明怎么办？是先有了“目空一切”的精神，没有把困难放在眼里，热火朝天、朝气蓬勃地在各地进行科普万里行，进行体验式营销，搞活动方法最笨也是最贴近消费者的摆地摊式的“广告”，

后来我们又创新地想到了“产品换广告”，在省报上刊登了一则广告，那则广告也说出了一种气势：“谁说太阳能热水器不能登大雅之堂？皇明太阳能敢与名牌家电同台竞美！”我的地盘我做主，我们的资源虽然有限，但我们有股豪气，有股子热情，年轻的皇明挥斥方遒，喊出了做中国太阳能第一品牌的口号，结果五年后做到了。

客观条件越差，困难艰险越多，实际机会越多，越有爆发力。企业发展中没有什么可担心的，团队的生存核心靠得就是斗志，逢山铺路，遇河搭桥，克服一个又一个困难，胜利会在眼前。个人也是一样，以小看老，要有独立的精神，要有奋斗的劲头！那种依赖、懦弱、不自信的人，不但给自己带来人生的灾难，同样也是团队里的淘汰对象。沉舟侧畔千帆过，病树前头万树春，团队不会让“病树”和“沉舟”所拖累和阻挡，照顾、呵护、拉哄这些“依赖症患者”，就是对团队其他人员的不公平，在鞭策促进他们未果的情况下，只有淘汰。个人更是要认清这些危机，认清这种病症，及时摆脱开依赖思想，活出朝气，活出自己的价值，活出人生的精彩！

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关于作者：

黄鸣：皇明太阳能集团董事长，十届全国人大代表，中国可再生能源学会副理事长。18年前，从石油专业转向致力于太阳能研究，为可再生能源的推广奔走呼吁实践，《中华人民共和国可再生能源法》议案发起人，志愿毕生精力投身于节约型和谐社会的建设，立志做可再生能源呐喊者，能源替代实践者，子孙利益代言人。联系方式：hmbk51@163.com查看黄鸣详细介绍浏览黄鸣所有文章进入黄鸣的博客

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