丹皮酚研究

2024-07-09

丹皮酚研究(精选七篇)

丹皮酚研究 篇1

1 材料与方法

1.1 药物

丹皮酚,经CO2超临界萃取法提取获得,每克丹皮酚相当于丹皮生药45.5g,批号20000413,由包头中药厂提供。临用时称取一定量丹皮酚充分研磨后,加入聚乙二醇400(5%)和吐温80(3~4滴/100mL)混匀,再加1%羧甲基纤维素钠配成所需浓度的混悬液。

1.2 药品与试剂

阿斯匹林肠溶片由天津中美史克制药厂有限公司生产(批号8903020);冰醋酸(分析纯)由北京化工厂提供;尹文思兰由上海化学试剂采购供应站提供;角叉菜胶由辽宁省药物研究所提供;生物染色剂结晶紫由北京化工厂提供。

1.3 动物

昆明种小鼠和Wistar大鼠,均由内蒙古大学实验动物研究中心提供,合格证号<京动字>8806M35。

1.4 方法

1.4.1 丹皮酚对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

小鼠50只,雌雄各半,体重18~22g,随机分为5组,每组10只。第1组为空白对照组,给予溶剂;第2组为阳性对照组,给予阿斯匹林400.0mg/kg;第3~5组为受试药高、中、低剂量组,分别给予丹皮酚50.0mg/kg、25.0mg/kg和12.5mg/kg。各组按0.2mL/10g灌胃给药,每日1次,连续3天。在末次给药后40分钟,尾静脉注射1%伊文思兰0.1mL/10g,随即腹腔注射0.8%醋酸每只0.2mL,20分钟后脱颈椎处死,剪开腹部皮肤,用10mL生理盐水冲洗腹腔数次,收集冲洗液并定容至8mL,离心(3000rpm×15分钟)后取上清液用721B型分光光度计在590nm处测定样品OD值[5]。

1.4.2 丹皮酚对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响

雄性大鼠50只,体重180±14g,随机分为5组。第1组为空白对照组,给予溶剂;第2组为阳性对照组,给予阿斯匹林300.0mg/kg;第3~5组为受试药高、中、低剂量组,分别给予丹皮酚32.0mg/kg、16.0mg/kg、8.0mg/kg。各组大鼠均以2mL/100g的容量灌胃给药,每日1次,连续3天。在末次给药后1小时,于大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜胶每只0.1mL,致炎后1、2、4、6小时分别测定足跖容积,计算出肿胀值(致炎后容积与致炎前容积之差)[6]。

1.5 统计学方法

结果以均值±标准差(x¯±s)表示,t检验,P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 丹皮酚对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

OD值越大,毛细血管通透性越大。表1结果表明,与溶剂对照组比较,阿斯匹林组和丹皮酚各剂量组的OD值降低,即丹皮酚可明显降低小鼠腹腔毛细血管通透性。

*与对照组比较,P<0.05;**与对照组比较,P<0.01

2.2 丹皮酚对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响

表2结果表明,各剂量组的丹皮酚均能显著抑制角叉菜胶所引起的大鼠足肿胀,作用1小时即非常明显,持续至4小时。

与对照组比较,行t检验 *P<0.05,**P<0.01

3 讨论

丹皮酚为脂溶性物质,极性较低,提取丹皮酚的传统方法有水蒸气蒸馏法、乙醇提取法和丙酮提取法,但含量和得率均不理想[4]。CO2超临界萃取法是近年应用较多的提取植物药有效成分的方法,主用于提取亲脂性强的低极性分子。实验证实,利用超临界萃取的丹皮酚色泽浅,含量高,香气浓,质量稳定[7]。本实验结果显示,丹皮酚可明显降低小鼠腹腔毛细血管通透性,显著抑制角叉菜胶所引起的大鼠足肿胀,呈现出较强的抗炎作用。实验结果表明,经CO2超临界萃取法提取的丹皮酚保持了牡丹皮提取物原有的药理活性,具有明显的抗炎作用。CO2超临界萃取工艺简便高效,本实验为丹皮酚实现CO2超临界萃取产业化生产提供了实验依据。

摘要:目的:观察二氧化碳(CO2)超临界提取的丹皮酚的抗炎作用。方法:用醋酸导致小鼠腹腔毛细血管通透性增加;用角叉菜胶导致大鼠足跖肿胀。结果:丹皮酚50.0、25.0、12.5 mg/kg灌胃给药,可明显降低小鼠腹腔毛细血管通透性;丹皮酚32.0、16.0、8.0mg/kg灌胃给药,能显著抑制角叉菜胶所引起的大鼠足肿胀。结论:经CO2超临界提取的丹皮酚具有明显的抗炎作用。

关键词:丹皮酚,二氧化碳,超临界提取,抗炎

参考文献

[1]李爱群.牡丹皮的药理研究[J].中草药,1989,19(6):36-38.

[2]章灵华,肖境根,黄艺,等.丹皮酚的药理与临床研究进展[J].中国中西医结合杂志,1996,16(3):187-190.

[3]李薇,王远亮,蔡绍皙,等.丹皮酚和阿司匹林对大鼠血液流变性影响的比较[J].中草药,2000,31(1):29-31.

[4]尹永宇.丹皮酚提取工艺的研究[J].中成药,1995,17(9):2-4.

[5]程丽芳,刘瑾,董方,等.骨质增生祛痛膏化淤消炎作用的实验研究[J].时珍国医国药,2006,17(7):1181-1183.

[6]徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,1982:525-532.

丹皮酚滴丸的质量标准研究 篇2

关键词:丹皮酚滴丸,HPLC

丹皮酚paeonol是中药材牡丹皮所含的主要有效成分, 具有镇静、催眠、解热、镇痛、抗炎等作用[1,2,3]。丹皮酚不易溶于水, 采用聚乙二醇为基质, 由片剂[WS-10001- (HD-0309) -2002]改变剂型制成滴丸剂。建立了丹皮酚滴丸的鉴别、检查方法, 采用HPLC法进行含量测定, 为监控丹皮酚滴丸的质量提供依据。

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪 (配有在线脱气机, 四元泵, 自动进样器, 柱温箱, 紫外检测器, Chemstions色谱管理系统) ;Sartorius BP211D十万分之一分析天平;ZRS-8G型智能溶出试验仪;岛津UV-2401紫外分光光度仪;LB-2B型崩解时限测定仪;Waters Symmertry®C18色谱柱 (5μm 3.9×150mm) ;丹皮酚滴丸 (山东绿叶天然药物研究开发有限公司, 批号:070402;070406;070410) ;丹皮酚对照品购自中国药品生物制品鉴定所 (批号:0708-9704) ;甲醇为色谱纯;磷酸为分析纯;去离子水。

2 鉴别

2.1 化学鉴别

取本品适量 (约相当于丹皮酚10mg) , 加乙醇2mL溶解后, 加重氮苯磺酸试液0.5mL, 摇匀, 加碳酸氢钠试液1滴, 渐显橙红色。同方法检查空白辅料, 无颜色变化, 表明空白辅料无干扰。

2.2 HPLC鉴别

取含量测定项下色谱图, 供试品主峰的保留时间与对照品丹皮酚峰的保留时间一致。

3 检查

3.1 重量差异检查

取本品20粒, 照 (中国药典2005年版二部附录I制剂通则H) 丸剂重量差异项规定进行检查, 结果表明平均丸重为0.05g, 重量差异限度均<±10%, 符合丸剂规定。

3.2 崩解时限

取本品, 照 (中国药典2005年版二部附录X A) 崩解时限检查法进行测定, 10min内崩解完全, 符合规定。

3.3 有关物质检查

3.3.1 色谱条件

色谱柱Waters Symmertry®C18 5μm 3.9×150mm, 甲醇-水-磷酸 (50∶50∶0.02) 为流动相, 检测波长274nm, 柱温:35℃, 流速:0.8mL/min。

3.3.2 供试品溶液的配制

取本品适量, 加0.02mol/L的氢氧化钠溶液制成每1mL含0.5mg的溶液, 滤过, 取续虑液作为供试品溶液。

3.3.3 对照溶液的制备

精密移取供试品溶液1mL于100mL量瓶中, 用0.02mol/L的氢氧化钠溶液定容, 摇匀, 制成5μg/mL的溶液作为对照溶液。

3.3.4 测定

取上述两种溶液各10μL分别注入液相色谱仪, 记录色谱图至主峰保留时间的2倍供试品溶液的色谱图中除溶剂峰外如有杂质峰, 计算各杂质峰面积的和, 与对照溶液主峰的面积进行比较, 测定结果表明有关物质均<1%。

3.4 溶出度

3.4.1 溶出曲线

取本品6粒, 分别以900mL水为溶剂, 转速为每分钟120转, 依法操作, 分别于5、10、15、25、35、45、50、60min在规定点取样 (取样点应在转篮上端距液面中间, 离杯壁10mm处) 10mL, 立即用0.45μm微孔滤膜滤过, 取续滤液作为供试品溶液。在275nm处分别测定吸收值, 计算溶出量, 测定结果表明本品45min的溶出度基本达到平台释放, 故选择50min作为本品溶出度测定取样时间。丹皮酚滴丸溶出曲线见图1。

3.4.2 测定

取本品共6粒, 照溶出度测定法 (中国药典2005年版二部附录X C第一法) , 以水900mL为溶剂, 转速为每分钟120转, 依法操作, 至50min时, 在规定点取样 (取样点应在转篮上端距液面中间, 离杯壁10mm处) 10mL, 立即经0.45μm的微孔滤膜过滤, 取续滤液作为供试品溶液;照分光光度法法 (中国药典2005年版二部附录IV A) 测定, 在275nm的波长处测定吸收度, 计算每粒的溶出量。测定结果表明, 本品在50min内溶出度均超过70%, 符合规定要求。结果见表1。

4 含量测定

4.1 色谱条件

同有关物质检查3.3.1项, 见图2。

4.2 对照溶液的制备

称取丹皮酚对照品约25mg, 精密称定, 置于50mL量瓶内, 用甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀。用移液管准确移取该溶液1mL, 置于10mL量瓶内, 0.02mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度, 摇匀, 制得每1mL约含50μg的对照溶液, 见图3。

4.3 供试品溶液的配制

取重量差异下的供试品, 精密称取10粒 (约相当于丹皮酚100mg) , 置200mL量瓶中, 用0.02mol/L氢氧化钠溶液溶解并定容至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液1mL置10mL量瓶中, 稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液, 见图4。

4.4 标准曲线与线性范围

精密称取丹皮酚对照品13.04mg, 置于25mL容量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为贮备液。用移液管分别移取该溶液0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0mL, 置10mL容量瓶中, 加0.02mol/L氢氧化钠溶液释至刻度, 摇匀, 制得工作标准溶液。取工作标准溶液各10μl, 测定峰面积。以丹皮酚峰面积为纵坐标, 丹皮酚浓度为横坐标绘制标准曲线, 计算回归方程为:y=60.5769x+53.0033, r=0.9999。结果表明当丹皮酚在2.608~260.8μg/mL范围内, 丹皮酚峰面积与浓度呈良好的线性关系。

4.5 仪器精密度

分别取浓度为26.08μg/mL和104.32μg/mL的对照品溶液, 连续进样测定6次, 记录色谱图和峰面积, RSD值分别为0.044%和0.039%, 表明仪器具有良好的精密度。

4.6 供试品溶液稳定性

取同一份供试品溶液, 每间隔1h, 测定丹皮酚峰面积, 结果表明溶液在7h内具有良好的稳定性, RSD值为0.37%。

4.7 重复性试验

取本品6份 (每份约相当于丹皮酚100mg) 各置6个200mL量瓶中, 0.02mol/L的氢氧化钠溶解并定容至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液1mL置10mL量瓶中, 稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液。再取丹皮酚对照品, 配成浓度为52.16μg/mL的对照品溶液, 上述两种溶液各10μL注入色谱仪, 测定含量, RSD为0.83%。

4.8 回收率试验

按处方量分别称取6份辅料, 分别置于6个200mL量瓶内, 分别加入适量丹皮酚对照品, 用0.02mol/L氢氧化钠溶液溶解并定容至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液1mL置10mL量瓶中, 稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液。平行测定, 测定结果见表2。

4.9 测定法

分别移取对照品溶液和供试品溶液各10μL注入色谱仪, 记录色谱图, 按外标法以峰面积计算即得。结果见表3。

5 讨论

采用化学反应显色法及HPLC法进行鉴别, 能够快速、简便的鉴别出丹皮酚。丹皮酚滴丸经重量差异、有关物质、崩解时限、溶出度检查, 检查结果均符合滴丸剂的要求。采用HPLC法进行含量测定, 经方法学验证均符合含量测定的要求, 丹皮酚含量在标示量的95%~105%, 符合含量限度要求。本实验所建立定性、定量检查方法可用于丹皮酚滴丸的质量控制。

参考文献

[1]孙文基谢世昌.天然药物成分定量分析[M].北京:中国医药科技出版社, 2003:345-348.

[2]章灵华, 肖培根, 黄艺等.丹皮酚的药理与临床研究进展[J].中国中西医结合杂志, 1996, 16 (3) :187-190.

[3]孟庆秋, 冀亚飞, 张亚秋.丹皮酚的提取及其衍生物的合成[J].徐州师范大学学报, 1998, 16 (2) :41-43.

丹皮酚研究 篇3

1.1 理化性质

丹皮酚为白色或微黄色有光泽的针状结晶, 无色针状结晶 (乙醇) , 熔点49~51℃, 气味特殊, 味微辣, 易溶于乙醇和甲醇中, 溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中, 稍溶于水, 在热水中溶解, 不溶于冷水, 能随水蒸汽挥发。丹皮酚为常用中药牡丹皮、徐长卿、芍药等的主要挥发性成分之一, 具有明显的降压、镇静和镇痛等药理作用。由于醋酸等因素导致的疼痛症状具有非常好的疗效。由蛋清、甲醛等毒素导致的炎症都有着非常好的抑制效果。对由于伤寒和疫苗导致的体温过高有着非常好的清热解毒的效果。日常生活中, 它可以减少我们身体中O2-自由基的增加, 对我们的皮肤有着增白的效果, 减少皮肤色素的沉积增加皮肤弹性。不仅如此, 在我们刷牙时如果加入少量丹皮酚有着对我们的牙龈疼痛都有着非常好的疗效。

1.2 检测方法比较

(1) 可以采用HPLC定量的方法进行丹皮酚的含量测定, 以甲醇-2%冰醋酸为流动项, 固定值相用HypersilODS柱, 检测波长为276奈米。 (2) 可以运用采用2005版药典规定方法对丹皮酚含量进行了比较检测。 (3) 利用毛细管气相色谱法来进行测定, 采用如下色谱条件:色谱柱, 熔融弹性毛细管柱, 涂布SE-300.26μm, N2流速60mL/min, H2流速50mL/min, 空气流速500mL/min, 柱温:180℃, 汽化器、检测器:320℃。以内标法计算含量 (以正十六烷为内标) 。

1.3 论述

采用现代科学技术手段对以前的测定方案改革, 不断提高测定含量的技术的思路是正确的。人类既要尊重传统, 继承传统, 更要有所前进, 有所创新。在制剂质量的控制方面的研究重点主要放在熊果酸和丹皮酚的测定方法的研究上, 这是否恰当。尚需研究如何才能真正控制中成药的质量是一个复杂的问题, 因为究竟该方的有效成分是什么还不甚清楚。在此情况下如能以生物效应的强弱作为质量控制的指标可能更客观些。

2 实验部分

2.1 实验器材和条件[1]

2.1.1 实验仪器

仪器:日本岛津CS910双波长薄层扫描仪, 化学试剂均为分析纯;硅胶:薄层层折用硅胶G (青岛海洋化工) ;丹皮酚对照品:中国药品生物制品检定所;六味地黄丸样品:马鞍山神鹿科瑞药业有限公司、九芝堂股份有限公司。

2.1.2 薄层扫描条件

扫描方式:反射法锯齿扫描;波长:λS=274nm, λR=365nm;扫描速度:20mm/min;狭缝3mm。

2.2 层析条件

薄层板:硅胶G薄层板20cm×20cm×0.4cm, 105℃, 活化30min备用;展开剂:环乙烷:氯仿:无水乙醇 (7∶3∶1) ;斑点观察:置紫外灯下 (λ=254nm) 检识定位。

3 实验步骤[2]

3.1 标准曲线

精密称定丹皮酚对照品50mg, 置50mL容量瓶中, 无水乙醇溶解并稀释至刻度, 使对照品溶液浓度为lmg/mL。精密吸取丹皮酚对照品溶液1、2、3、4、5μL点样于同一硅胶板上, 按层析条件展开, 置紫外灯下 (λ=254nm) 检识定位, 扫描测得峰面积积分值, 。线性方程为:Y=1.555.5X+4743, 相关系数为0.9899。

3.2 精密度试验

准确吸取标准品溶液5µL, 在同一薄层板上点5个相同量的点, 依法测定各斑点的斑面积积分值, 计算精密度。结果下列数据。计算RSD=2.8% (n=5) , 说明本方法精密度较好。其对照品的测定值分别为:17234, 16554, 18888, 16908, 15048, 16926.7±481.5, 2.8RSD (%) 。

3.3 稳定性试验

我们队标准品的斑点进行稳定性试验, 通过技术测量峰面积, 每过20民、测量一次, 这样连续进行五次测量。结果得出如下列数据所述, 其峰面积基本是稳定的。丹皮酚标准品稳定性实验结果, 第一到第五对照品的测定值分别是:16671, 16908, 16710, 16799, 16374, 16692.3±209.8, 1.264 RSD (%) 。

3.4 样品含量测定[3]

称取六味地黄丸20g, 研碎, 置圆底烧瓶中, 加无水乙醇80mL, 然后提出3h, 过滤液, 然后量瓶定容100mL。精确的分别对样品进行吸取, 10µL及丹皮酚对照品5µL, 交叉点于同一硅胶薄板上。按层折条件展开, 扫描测得峰面积积分值, 用外标法计算丹皮酚含量。

3.5 回收率试验

采用加样回收法。称取已知含量的厂家1六味地黄丸样品5份约20g, 分别制作出相关对照项15mg, 然后根据样品含量的标准来制作备用溶液, 最后进行测量, 得出的结果是丹皮酚的添加回收率为93.12%, RSD为3.44% (n=5) 。见表1。

4 讨论

4.1 实验误差分析

薄层扫描法 (TLCS) 系指用一定波长的光照射在薄层板上, 对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描, 将扫描得到的图谱及积分值用于药品的质量检查的方法。其扫描测量结构的误差主要来自点量、展开、扫描中的斑点定位和扫描过程本身。在这次实验中, 丹皮酚对照品标准曲线中相关系数值 (R) 为0.9899, 相对较低。分析实验过程, 可能由以下几个因素导致: (1) 薄层点样时, 取样体积不够准确。 (2) 薄层板上点样的时候没有使样品吹干而接着点样, 导致点样斑点过大, 较大的影响了实验[4]。 (3) 层析缸中展开剂饱和时间较短, 影响展开效果。 (4) 薄层板在展开剂中展开的时, 有较严重的边缘效应, 从而使得展开的各个斑点没能很好的成一直线, 这是扫描过程中会产生较大误差, 使得实验结果受到影响。一般在薄层色谱中, 薄层板两边展开剂跑得比较快, 使得展开前沿形成一道弧线, 称为边缘效应。边缘效应的产生是由于溶剂的挥发造成的, 展开剂一般是由几个有机溶剂混合而成的, 而在薄层板上一般是边缘上的展开剂较容易挥发, 如果这几个有机溶剂的挥发性能差异比较大, 那么就会造成薄层板上边缘和中间展开剂比例的差异而产生展开速度不一致的现象。为了避免边缘效应, 就要做到: (1) 保持展缸内不的气体饱和; (2) 点样的时候, 避免点在边缘, 从而减小边缘效应[5]。

4.2 外标法测定

本实验采用了外标法测定丹皮酚的含量, 外标法是色谱分析中的一种定量方法, 它不是把标准物质加入到被测样品中, 而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定, 把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较求得被测组分的含量。外标物与被测组分同为一种物质但要求它有一定的纯度, 分析时外标物的浓度应与被测物浓度相接近, 以利于定量分析的准确性[6]。

5 总结

通过上文的研究和实验, 我们可以看到利用薄层色谱扫描法来进行测定丹皮酚在六味地黄丸中的含量是十分简便的, 灵敏度相对也比较高, 这一方法也同样可以运用在牡丹皮等治剂中的测定。

摘要:六味地黄丸是最常用的中成药之一, 具有滋阴利水之功, 尤对阴虚湿停证更为适宜。中医上称六味为酸苦甘辛咸淡, 六味之名以此六味地黄丸中山茱萸含铬量最高, 通过对此丸微量元素测定, 说明对动脉粥样硬化和糖尿病有预防作用。六味地黄丸能拮抗醋酸氢化可的松肾阳虚模型引起的脾脏重量减轻, 似与中医“阳化气, 阴成形”理论相关。江扬聪研究证明六味地黄丸能控制血糖水平在正常范围内, 从而使临床症状明显改善。

关键词:六味地黄丸,丹皮酚含量

参考文献

[1]崔连有, 刘有娥.六味地黄丸利水功效初探[J].时珍国医国药, 2000, 11 (3) :245.

[2]国家药局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社, 1998:1246.

[3]李顺成, 钱瑞琴, 范维峥, 等.六味地黄汤及杞菊地黄汤对老年小鼠免疫衰老的调整作用[J].中成药, 1990, 12 (10) :28~29.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典 (一部) [M].北京:化学工业出版社, 2002:358.

[5]李萍, 石晓宏, 王风连.六味地黄丸和地黄的免疫药理研究[J].中国免疫学杂志, 1987, 3 (5) :296-298.

丹皮酚研究 篇4

1 提取工艺

从生药徐长卿和牡丹皮中提取丹皮酚的方法主要有有机溶剂浸出法、水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法等。李玉贤等[2]比较了水蒸气蒸馏法、碱溶液浸泡—酸中和—水蒸气蒸馏法、酸溶液浸泡—水蒸气蒸馏法、盐溶液浸泡—水蒸气蒸馏法4种工艺,优选出直接水蒸气蒸馏法作为实验室从牡丹皮提取丹皮酚的最佳方法。王立等[3]采用醇提法、蒸馏—煎煮法和传统煎煮法对牡丹皮进行提取,丹皮酚的收率依次为2.45%、2.26%、1.15%。实际生产中醇提法后处理复杂,除去乙醇过程中易损失丹皮酚,而蒸馏—煎煮法工艺简便,是牡丹皮提取的一种切实可行的方法。王立红等[4]在萃取压力15MPa、萃取温度52℃、CO2流量3.2L/h、萃取时间2h的条件下对徐长卿进行CO2超临界流体萃取,以丹皮酚收率为指标,与水蒸汽蒸馏法、乙醇提取法进行比较,实验结果表明所得丹皮酚收率高于其它两种方法,显示出超临界萃取法提取温度低、提取率高、时间短等优点。

2 药理作用

2.1 对心、脑血管的作用

2.1.1 抗动脉粥样硬化作用

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是冠心病、中风、脑梗死等心脑血管疾病的主要病理基础。研究表明,在兔、大鼠等多种实验性AS动物模型中,丹皮酚均能降低模型动物血清中总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)水平[5],具有改善血液流变学、降低脂质、抑制脂质过氧化等作用[6]。

2.1.2 抗心肌梗死作用

丹皮酚能明显减少冠脉结扎致实验性心肌梗死犬的心肌梗死面积、降低心肌梗死程度、减少心肌酶的释放,同时可提高模型犬血清中SOD的活力,增强清除自由基能力,降低血清中MDA的含量,减轻脂质过氧化损伤的程度。其作用机制可能是通过稳定细胞膜,抑制缺血心肌的膜损伤,清除自由基,降低脂质过氧化等发挥作用[7]。

2.1.3 抗心律失常作用

张广钦等[8]采用大鼠心肌缺血再灌注模型观察丹皮酚的抗心律失常作用,结果表明80mg/kg、160mg/kg丹皮酚能不同程度降低室颤(VF)及室速(VT)的发生率,缩短其持续时间,并能缩小心肌梗塞范围,抑制SOD活性下降及MDA含量的升高,其机制可能与抗氧化作用有关。侯刚健[9]等用垂体后叶素造成豚鼠急性心肌缺血模型,观察丹皮酚及合剂对豚鼠急性心肌缺血引起的心律失常及其对豚鼠心电图S-T段和T波的影响,发现丹皮酚能明显降低心律失常发生率,延长心律失常间隙时间,缩短心律失常发作持续时间,并有明显的抗心肌缺血作用。

2.1.4 抗脑缺血再灌注性损伤的作用

武继彪等[10]采用大鼠大脑动脉栓塞模型,观察缺血再灌注24h后,大鼠神经功能症状评分、脑梗死体积测定、病理组织学变化以及脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)的含量,结果显示丹皮酚干预后大鼠神经功能症状评分提高,脑梗死体积缩小,脑缺血再灌注损伤脑组织的病理改变减轻,SOD、GSH-Px、CAT的活性升高,MDA含量减少,提示丹皮酚保护缺血脑组织的作用机理可能与抗自由基损伤有关。

2.2 抗肿瘤作用

孙国平等[11]通过MTT体外试验法和体内抗肿瘤试验检测了丹皮酚对人红白血病细胞K526、人乳腺癌细胞T6-17和肝癌细胞BEL-7404的细胞毒及抑制作用,发现丹皮酚3.91~250mg/L对人红白血病细胞K562及人乳腺癌基因细胞T6-17的生长均有抑制作用,且抑制率随药物的浓度升高而升高,其IC50分别为25.38和10.81mg/L;对BEL-7404的抑制作用较差,在31.25mg/L浓度下抑制率仅为15.70%,IC50为93.39mg/L,表明丹皮酚对肿瘤细胞的生长抑制作用呈现浓度依赖性,而且对不同的细胞株具有选择性抑制作用。进一步的实验研究发现,诱导细胞凋亡、调节白细胞介素Ⅱ和肿瘤坏死因子的释放可能是丹皮酚抗肿瘤作用的重要机制[12]。史浩[13]等研究了丹皮酚对人结肠癌Lo Vo细胞增殖的影响,发现丹皮酚在7.81~250mg/L浓度范围内均能抑制结肠癌Lo Vo细胞的增殖,且抑制作用随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强,具有明显的量效和时效关系。除了自身具有直接抑制肿瘤细胞增殖的作用外,丹皮酚还对多种化疗药物有增敏作用,其中以丹皮酚和5-脲嘧啶联用的协同作用最为显著[14]。

2.3 增强免疫力作用

丹皮酚能提高巨噬细胞的吞噬功能,使小鼠血清溶血素明显增加,增强二硝基氯苯所致的皮肤迟发性变态反应,对特异性体液免疫功能、特异性细胞免疫功能及非特异性免疫功能均有增强作用[15]。应康等[16]对小鼠进行灌胃给药,注射植物血凝素攻击,观察脾脏指数和胸腺指数及淋巴细胞转化率,结果显示丹皮酚75.4mg/kg、37.7mg/kg、18.9mg/kg。给药组与对照组相比,脾脏指数、胸腺指数明显升高,淋巴细胞转化率明显提高,表明丹皮酚对小鼠免疫功能有增强作用。

2.4 抑菌作用

早期研究发现丹皮酚在体外l∶15 000浓度下对大肠杆菌、枯草杆菌有明显抑制作用,在体外1∶2 000浓度下对金黄色葡萄球菌有明显抑制作用,对流感病毒及常见致病性皮肤真菌亦有抑制作用。高健等[17]通过琼脂扩散抑菌试验证明,丹皮酚及其衍生物对受试的白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌和肺炎克雷伯氏菌4种革兰氏阴性菌、阳性菌皆有明显的抑制作用。

2.5 抗炎作用

武海军等[18]用醋酸致小鼠腹腔炎症模型、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型对丹皮酚抗炎活性进行研究,当给予不同剂量灌胃治疗后,丹皮酚可明显降低小鼠腹腔毛细血管通透性,显著抑制角叉菜胶所引起的大鼠足跖肿胀,呈现出较强的抗炎作用。

2.6 镇痛作用

刘爱敏等[19]采用醋酸扭体法和热板法观察了丹皮酚的镇痛作用,发现丹皮酚可明显减少醋酸所致小鼠的扭体反应次数,使热刺激所致小鼠疼痛的阈值明显提高,具有明显的镇痛作用。

3 药物动力学研究

3.1 小鼠体内药物动力学

给正常小鼠单次50mg/kg丹皮酚灌胃(ig)给药后,用HPLC法检测不同时间间隔血药浓度,结果显示正常小鼠灌胃(ig)丹皮酚后,体内药动学过程符合单室模型一级吸收,药物进入体内迅速分布,代谢消除也较快[20]。

3.2 大鼠体内药物动力学

大鼠随机分组,分别灌胃和静脉注射丹皮酚10mg/kg,于给药后不同时间采集血样,采用HPLC法测定血药浓度,结果显示丹皮酚不同给药途径的体内药代动力学过程不同,灌胃给药后丹皮酚生物利用度较低,为28.92%,其原因可能与吸收不完全或首过效应较强有关[21]。

当给予大鼠丹皮酚及其包合物时,肠道各部位的吸收速率按空肠、回肠、十二指肠、结肠顺序下降,药物在肠道内的吸收呈现一级吸收动力学过程,其吸收机制为被动扩散。丹皮酚包合前后在大鼠小肠全肠段(结肠部位除外)都有良好吸收,吸收机制没有发生明显改变,因此,可以考虑将丹皮酚制成丹皮酚-β环糊精在制剂中使用,以提高丹皮酚的稳定性[22]。

4 结语

大量研究证实,丹皮酚是药理活性广泛、高效、低毒,在心脑血管系统疾病和肿瘤防治等方面具有广阔的开发前景和临床应用价值。积极开展丹皮酚与其它中药分子的组方药理活性及其药代动力学等方面的研究,对创制分子中药、促进中药现代化具有重要意义。

摘要:目的:对丹皮酚近年来的药理、药物动力学实验研究作一综述,以提高对丹皮酚的研究水平。方法:查阅大量国内外文献,总结、提炼和阐明丹皮酚的研究前景。结果:丹皮酚具有显著的改善血液流变学、降脂质、抑制脂质过氧化、抗肿瘤、抗炎、镇痛等药理活性。丹皮酚小鼠灌胃体内药代动力学过程符合单室模型;大鼠灌胃丹皮酚的生物利用度仅为28.92%,存在吸收不完全或首过效应;大鼠静脉注射丹皮酚及其包合物,肠道各部位的吸收速率:空肠>回肠>十二指肠>结肠,呈现一级吸收动力学过程,其吸收机制为被动扩散。结论:丹皮酚作为有效中药分子用于开发治疗冠心病、脑卒中等药物具有良好前景,探讨其分子中药组方的药理活性及其药代动力学特征,对创制分子中药、促进中药现代化具有重要意义。

丹皮酚研究 篇5

1 材料与方法

1.1 细胞

人近曲小管上皮细胞HK-2:购自中国科学院昆明细胞库。

1.2 药物与试剂

丹皮酚对照品:购自中国药品生物制品检定所,批号:110708-200506。DMEM高糖培养基、胎牛血清:购自美国Gibco公司;E-cadherin和Vimentin一抗:购自英国Abcam公司。

1.3 HK-2细胞培养

HK-2细胞置于10%胎牛血清的DMEM/F12(1:1)培养基中,置于37℃、5%CO2培养箱中培养。

1.4 分组与给药

实验共分5组:无血清对照组(正常组)、TGF-β1组、TGF-β1+Pae低剂量组(10 mg/L)、TGF-β1+Pae中剂量组(50 mg/L)、TGF-β1+Pae高剂量组(100 mg/L)。细胞以2×105个/m L密度接种于6孔板,每孔加2 m L,每组设2个复孔。在37℃、5%CO2培养箱培养过夜。给药前吸弃细胞上清,换无血清培养基静止24 h。然后按分组加入含相应浓度药物的培养液,对照组直接加入无血清培养液。

1.5 细胞形态学变化

倒置显微镜下观察

1.6 E-cadherin和Vimentin蛋白水平的检测

Western blot法。

以细胞密度1×105个/well接种于6孔板。药物作用24 h后,收集细胞,离心,PBS漂洗后,加入细胞裂解液,提取细胞总蛋白。经BCA法测定蛋白浓度及变性后,进行SDS-PAGE凝胶电泳,转膜,封闭,分别加入一抗E-cadherin(1:1000)、Vimentin(1:1000)和β-actin(1:2 000),4°C孵育过夜。次日,TBST洗膜3遍,加入荧光标记的二抗(1:2000),室温孵育1 h。采用Odyssey近红外双色激光成像系统,设置700 nm波长下强度3.0,800 nm波长下强度5.0,按照膜实际大小,确定扫膜范围,进行扫膜。

1.7 Twist mRNA表达变化

荧光定量PCR法检测。

根据Trizol试剂盒说明书提取细胞总RNA,核酸蛋白分析仪测定RNA的浓度和纯度,琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA完整性。取3μg RNA逆转录合成c DNA,进行real-time PCR。反应条件为:95℃3 min;48个循环(95℃10 s,60℃30 s);溶解曲线:从55℃开始,每30 s升高0.5℃,直到95℃,循环1次。所有反应信息资料由Bio-Rad i Q5 PCR仪收集,Ct值通过计算机软件测量和计算。

1.8 统计学处理

所有数据均采用SPSS 17.0软件统计处理,计量资料以均数±标准差(±s)表示;计量资料两两比较采用t检验。

2 结果

2.1 丹皮酚对TGF-β1诱导HK-2细胞形态学改变的影响

倒置显微镜下观察,正常对照组细胞呈铺路石样贴壁生长,10μg/LTGF-β1刺激后,细胞似成纤维细胞状生长;丹皮酚与TGF-β1共同作用于细胞后,梭形样细胞大量减少,细胞形态以上皮细胞样为主,高剂量组效果最显著。

2.2 丹皮酚对TGF-β1刺激后HK-2细胞E-cadherin和Vimentin蛋白表达的影响

Western blot结果显示,TGF-β1刺激后HK-2细胞中Vimentin蛋白表达显著上升,而E-cadherin蛋白呈低水平表达;与TGF-β1组比较,丹皮酚各剂量组能剂量依赖的降低Vimentin蛋白表达,提高E-cadherin蛋白表达。

2.3 丹皮酚对TGF-β1刺激后HK-2细胞Twist mRNA表达变化的影响

RT-PCR结果显示,与正常组比较,TGF-β1刺激后HK-2细胞中Twist mRNA表达显著上升;与模型组比较,丹皮酚能剂量依赖地降低HK-2细胞中Twist mR-NA表达,差异有统计学意义。

与正常组比较▲P<0.05,▲▲P<0.01;与模型组比较*P<0.05,**P<0.01

3 讨论

肾间质纤维化是慢性肾脏病发展为终末期肾衰的关键环节,而肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)是肾间质纤维化的主要细胞学行为[3]。EMT是指上皮细胞在某些生理或病理条件下失去上皮细胞特征(如E-cadherin)并获得间充质细胞特征(如a-SMA,Vimentin)的生物学过程[4]。大量研究发现twist与E-cadherin表达息息相关,高表达twist蛋白可以导致E-cadherin表达下降,提示twist是影响肾间质纤维化程度的重要因子之一[5]。

中医无肾间质纤维化一词,但是在肾间质纤维化病变的过程中伴有细胞外基质积聚和成纤维细胞增生,属中医"癥积"范畴,瘀是构成肾间质纤维化的病理基础,因此中医抗肾纤维化的常用治法为活血化瘀法。瘀血是邪实之首,活血化瘀法可以改善肾内血液循环,抑制血小板聚集,防止微血栓形成。

丹皮酚是毛茛科植物牡丹皮的主要有效成分,具有清热凉血、活血化瘀等功效。Lee等[6]观察了丹皮酚对化疗药物顺铂产生的急性肾衰竭小鼠的保护作用,结果表明治疗组小鼠血肌酐、尿素氮水平、炎性细胞因子与NO水平均明显降低,表明丹皮酚有很好的预防顺铂肾毒性的作用。时召平等[7]观察了丹皮酚对大鼠急性心肌梗死所致心肌纤维化的作用,研究结果显示丹皮酚具有抗急性心肌梗死所致大鼠心肌纤维化的作用,其机制可能与其干预TGF-β1/smad信号通路有关。

本实验研究结果显示:10μg/LTGF-β1刺激后,细胞似成纤维细胞状生长,Vimentin蛋白表达显著上升,而E-cadherin蛋白呈低水平表达;丹皮酚与TGF-β1共同作用于细胞后,梭形样细胞减少,细胞形态以铺路石状为主;同时丹皮酚各剂量组能剂量依赖的降低Vimentin蛋白表达,提高E-cadherin蛋白表达。以上结果表明,丹皮酚能显著抑制HK-2细胞转分化,其作用机制可能与抑制Twist mRNA表达有关。

摘要:目的:探讨丹皮酚(Paeonolum,Pae)对TGF-β1诱导HK-2细胞转分化的抑制作用及机制。方法:将细胞分为5组:无血清对照组、TGF-β1组、TGF-β1+10 mg/L Pae组、TGF-β1+50 mg/L Pae组、TGF-β1+100 mg/L Pae组。TGF-β1作用24 h,后加入相应药物继续培养48 h,用倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,Western blot法检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达的变化,RT-PCR法检测Twist mRNA表达变化。结果:①倒置显微镜下观察:10μg/L TGF-β1刺激72 h后,HK-2细胞形态发生明显改变,变成长梭形,且细胞间的缝隙变大,Pae各个剂量组作用后,细胞的形态趋向于铺路石状,高剂量组变化最显著。②Western blot结果显示:丹皮酚组能剂量依赖地提高E-cadherin蛋白表达,降低Vimentin蛋白表达。③RT-PCR结果显示丹皮酚能剂量依赖地降低HK-2细胞的Twist mRNA表达。结论:丹皮酚能显著抑制TGF-β1诱导HK-2细胞转分化萁作用机制可能与抑制Twist mRNA表达有关。

关键词:丹皮酚,@HK-2细胞转分化,基因表达

参考文献

[1]时召平,徐倩,曹凯.丹皮酚对大鼠急性心肌梗死所致心肌纤维化的影响及机制[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(9):150-155.

[2]覃星柳,杨萍.丹皮酚对大鼠肝纤维化治疗作用的实验研究[J].河北中医,2015,37(4):546-549.

[3]Thiery JP,Acloque H,Huang RY,et al.Epithelial-mesenchymal transitions indevelopment and disease[J].Cell,2009,139:871-890.

[4]Carew RM,Wang B,Kantharidis P.The role of EMT in renal fibrosis[J].Cell Tissue Res.2012,347(1):103-116.

[5]Bai Y,Lu H,Wu C,et al.Resveratrol inhibits epithelial-mesenchymal transition and renal fibrosis by antagonizing the hedgehog signaling pathway[J].Biochem Pharmacol,2014,92(3):484-93.

[6]Lee H,Lee G,Kim H,et al.Paeonol,a major compound of moutan cortex,attenuates Cisplatin-induced nephrotoxicity in mice[J].Evid Based Complement Alternat Med,2013:310989.

丹皮酚研究 篇6

丹皮为毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的干燥根皮,其味苦、辛,性微寒,归心、肝、肾经,具有清热凉血、活血散瘀之功效[1]。丹皮始载于《神农本草经》,并列为中品[2,3]。《名医别录》有云:“生巴郡(今四川境内)山谷中及汉中(今陕西境内)。色赤者为好,用法去心。”《新修本草》载:“生汉中,剑南(今四川成都及其附近地区)所出者苗似羊桃——内白皮丹。土人谓之白两金,长安谓之牡丹者,是真也。”可见丹皮在古代主产于四川,且以野生为主。目前,牡丹皮主要产自安徽铜陵、南陵,习称“凤丹皮”,为丹皮药材正品来源[4,5,6],其他如陕西、河南、山东等地也有大面积种植[7]。丹皮酚作为牡丹皮的主要有效成分,具有抗炎、镇痛、解痉等多种药理作用[8,9,10]。本文以丹皮酚为指标性成分,测定了包括道地产区安徽在内的5个主产区15个牡丹皮样品中丹皮酚百分含量,并进行了相应比较,以便为丹皮的进一步开发利用提供科学依据。

2 材料、仪器与试剂

材料:药材分别采集于重庆、陕西、河南、山东、安徽5个省市,经秦松云副研究员鉴定均为毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的干燥根皮,见表1。

仪器与试剂:美国安捷伦公司高效液相色谱仪1200(VWD检测器,自动进样器,柱温箱,ChemStation化学工作站),KQ250DB型数控超声波清洗器(巩义市予华仪器有限责任公司),AW-220型万分之一电子天平(日本岛津公司);甲醇(色谱纯,SK Chemicals公司),甲醇(分析纯,重庆川东化工有限公司),水为去离子水,丹皮酚由中国药品生物制品检定所提供(批号:0708-0506)。

3 方法与结果

丹皮酚含量测定:①色谱条件。色谱柱:菲罗门LunaC18柱(5μm,4.6mm×250mm),流动相为甲醇—水(45∶55),流速1mL/min,检测波长为274nm。②对照品溶液制备。精密称取丹皮酚对照品5.4mg置入250mL容量瓶中,色谱甲醇超声溶解定容至刻度,摇匀备用。③供试品溶液制备。取本品粗粉约0.3g,精密称定置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇30mL,密塞,摇匀,称定重量,超声处理30min;放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤。精密量取续滤液1mL,置入10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀即得。④标准曲线制备。分别精密吸取对照品溶液2μL、4μL、8μL、10μL、15μL、20μL,进样按上述色谱条件测定其峰面积,以丹皮酚峰面积为纵坐标(Y),进样量为横坐标(X),进行线性回归,得回归方程:Y=492186X-34532,r=0.9997,线形范围为0.432—4.32μg。⑤精密度试验。精密吸取对照品10μL连续进样5次,测定峰面积,计算RSD为0.62%,结果表明仪器精密度良好。⑥重现性实验。取8号样品5份,按“供试品溶液制备”项下方法制备供试品,进样10μL,测定峰面积,并计算丹皮酚含量,RSD为2.94%,结果表明该方法重现性良好。⑦稳定性实验。取8号样品一份,按“供试品溶液制备”项下方法制备供试品,分别于0、2h、4h、6h、8h进样10μL,测定其峰面积,计算RSD值为0.34%,结果表明样品在8h内稳定。⑧加样回收实验。取已知含量的8号样品5份,每份约0.15g,精密称定,再加入相当于样品含量的对照品(0.792mg/mL)4mL,按“供试品溶液制备”项下方法制备供试品,进样10μL,测定峰面积,计算丹皮酚含量,结果平均回收率为100.08%,RSD为2.85%(n=5)。⑨样品测定。取重庆、陕西、河南、山东、安徽丹皮样品15份,按“供试品溶液制备”项下方法制备供试品,测定峰面积,计算丹皮酚含量,结果见图1、表2。

4 讨论

产地以丹皮酚平均百分含量排序:安徽丹皮>陕西丹皮>山东丹皮>河南丹皮>重庆丹皮。其中,除重庆市长寿区样品未达药典要求外,其余样品均符合药典规定,且以安徽省平均含量为最高。实验证明,道地产区丹皮酚含量明显高于非道地产区,安徽铜陵、南陵作为全国丹皮药材的道地产区是勿庸置疑的。不同地区丹皮中丹皮酚含量有较大差异,即使是同一地区的样品也存在着一定的差别,这可能与样品生长年限、采集时间、地理分布、土壤、气候等诸多因素有关,有待于做进一步研究。

摘要:用高效液相色谱法测定5个产地丹皮药材的丹皮酚含量。色谱柱为菲罗门LunaC18柱(5μm,4.6mm×250mm),流动相为甲醇—水(45∶55),流速1mL/min,检测波长274nm,柱温25℃。结果表明,丹皮酚在0.432—4.32μg线性良好,相关系数r=0.9997,平均回收率为100.08%,RSD为2.85%(n=5)。丹皮酚含量按其平均值为安徽丹皮>陕西丹皮>山东丹皮>河南丹皮>重庆丹皮。该方法快速简便,结果准确可靠。

关键词:HPLC,丹皮,丹皮酚

参考文献

[1]国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005∶119.

[2]赵学龙,等.牡丹皮炮制历史沿革的研究[J].中华中医药学刊,2008,26(9)∶1907-1910.

[3]魏.吴普.神农本草经[M].沈阳:辽宁科学技术出版社,1997∶28.

[4]唐.苏敬,等.新修本草[M].安徽:安徽科学技术出版社,1981∶200.

[5]魏晋.陶弘景.名医别录[M].北京:人民卫生出版社,1986∶243-244.

[6]张朋,等.牡丹皮产地与采收加工的沿革与变迁[J].甘肃中医杂志,2008,21(9)∶48.

[7]中华本草编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999∶528-535.

[8]孙言才,等.丹皮酚的主要药理活性研究进展[J].中国保健,2004,(9)∶579-582.

[9]邢国胜,等.丹皮酚的制备及药理作用研究进展[J].中草药,2006,37(11)∶2-7.

丹皮酚研究 篇7

1 仪器与试药

Waters2690液相色谱仪,PDA996检测器,Millennium32色谱工作站,AE240电子天平。丹皮酚对照品(708-9003,中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯,重蒸馏水,其余为分析纯;样品:杞菊地黄胶囊(批号:051201、051202、051203,由四川美大康药业股份有限公司提供)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Shim-pack CLC-ODS(150×6.0mm,5um);流动相:甲醇-水(60:40);流速:1.0mL/min;柱温:30℃;检测波长:274nm。结果:丹皮酚峰与相邻峰的分离度>2,峰形对称,理论板数以丹皮酚峰计算>4000。缺牡丹皮阴性对照无干扰。见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取丹皮酚对照品,精密称定,加甲醇制成每1mL含30μg的溶液,即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品装量差异项下的内容物1g,精密称定,置具塞三角瓶中,精密加甲醇50mL,称定重量,置水浴中加热回流30min,取出,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,弃去初滤液,取续滤液,离心,即得。

2.2.3 缺丹皮阴性对照溶液的制备

取缺丹皮阴性对照样品,按供试品溶液的制备方法制备,即得。

2.3 线性关系

精密称取丹皮酚对照品0.01920g,置50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备溶液。

分别精密吸取对照品贮备溶液2.0 m L、1 5.0 m L,分别置于25mL、50mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液A、B。

精密吸取对照品溶液A 1.0、5.0、10.0、20.0μL,对照品溶液B 10.0、20.0μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以进样量X(μg)对峰面积Y进行线性回归,得回归方程为:Y=4904734X-1890,r=0.9998;表明丹皮酚在0.03~2.3μg之间呈良好的线性。

2.4 精密度试验

分别精密吸取对照品溶液A与供试品溶液(批号051202)各10.0μL,按上述色谱条件连续进样5次,测定峰面积。结果对照品RSD=1.8%,样品RSD=2.1%。

稳定性试验取样品(批号051202)适量,按供试液制备方法制备供试液,与上述对照品溶液A于0、1、2、4、8、16h分别精密吸取10.0μL,按上述色谱条件测定。结果对照品RSD=2.20%,样品RSD=2.56%。表明对照品溶液、样品溶液在16h内测定基本稳定。重现性试验取样品(批号051202)1g共5份,按样品分析方法进行测定,测得平均含量为1.13(mg/g),RSD=2.70%。加样回收率试验取样品(批号051202)适量9份,分别加入不同量的对照品(低、中、高3种浓度各平行3份),按样品分析方法进行处理,并各平行测定2次,结果平均回收率为98.39%,RSD=1.69%(n=9)。

3 样品测定

按上述色谱条件,对三批样品(批号:051201、051202、051203)进行测定,结果本品每粒含牡丹皮以丹皮酚(C9H10O3)计分别为0.38、0.33、0.48mg。

4 讨论

4.1 实验曾用水蒸气蒸馏提取,用分光光度法(E值法)测定丹皮酚含量[1],结果丹皮酚含量为2.46mg/g。后采用HPLC法测定,结果丹皮酚含量为1.01mg/g。考虑到分光光度法(E值法)测定含量高可能是其它成分的影响,而HPLC法分离度高,能准确测定丹皮酚含量,故选用HPLC法测定丹皮酚含量。

4.2 提取条件的选择供试液制备中,对提取溶剂(甲醇、三氯甲烷、乙醚),提取方法(回流、超声、浸渍),提取时间(15、30、45、60、90、120min)进行了考察。结果用甲醇回流30min为最佳提取条件。

4.3 试验曾对丹皮酚对照品及供试品色谱中丹皮酚峰在二极管阵列检测器(PDA996)进行扫描,结果:二者均在274nm波长处有最大吸收,试验选择274nm作为检测波长。

参考文献

[1]中华人民共和国药.2005年版(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005.119.

[2]郑虎占.中药现代研究与应用[M].北京:学苑出版社,1998,3:2373~2378.

上一篇:百花齐放下一篇:现状分析与对策